NED373390NED

222 Актуальные вопросы болезней птиц и других видов животных ровали при 7000 об/мин (2000 g) в течение 30 мин. После центрифугиро- вания жидкость из пробирок полностью отсасывали. Затем к осадку до- бавляли 30-50 мкл буфера STE, ресуспендировали активным перемеши- ванием и далее использовали при подготовке препаратов для электронной микроскопии. Присутствие нанобактерий в образцах устанавливали по их морфологическим признакам и с учетом количественной характеристики. Инокуляция нанобактерий животным. В опытах по экспериментально- му заражению использовали не менее 50 кроликов. Материалом для зараже- ния служили образцы крови от крупного рогатого скота и кроликов, в образ- цах которых были выявлены клетки нанобактерий. Для инокуляции готовили очищенные двукратным центрифугированием образцы разведенной крови. Подготовленные образцы крови, как описано выше, для контроля под электронным микроскопом ресуспендировали не в 50 мкл буферного рас- твора, а в 1 мл и затем инокулировали животным. Инокуляцию проводили в краевую вену уха объёмом суспензии нанобактерий 1 мл при концентра- ции клеток 10 7 -10 8 клеток/мл. До инокуляции и через 4 часа после инокуляции у животных контро- лировали температуру тела. Затем в течение всего опыта проводили еже- дневный контроль температуры и забор крови для контроля под электрон- ным микроскопом. У животных до инокуляции проводили контрольный забор крови из ушной вены. Четыре-пять капель крови сразу же помещали в пробирки типа Эппендорф с 1 мл буфера STE рН 7,4 и замораживали при темпера- туре жидкого азота (-196ºС). Электронная микроскопия . Образцы крови наносили на поддер- живающие угольно-парлодионовые пленки-подложки, контрастирова- ли 4% раствором ФВК рН 6,8 и исследовали в электронном микроско- пе JEM-100B (Япония) при инструментальном увеличении 9000-20000. Результаты и обсуждение В опытах по контролю крови использовали несколько групп кроли- ков численностью от 10 до 60 особей, которые поступали в лабораторию для контроля иммуногенной активности противовирусных вакцин. Всего было задействовано в опытах более 200 животных, от которых получали кровь. От убитых животных отбирали фрагменты паренхиматозных орга- нов для приготовления 10% суспензий и последующей подготовки соот- ветствующих препаратов для электронной микроскопии (5). Электронно-микроскопический анализ крови животных. Анализируя образцы крови из различных партий кроликов, следует указать на то, что в Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека