NED373390NED

186 Актуальные вопросы болезней птиц и других видов животных Материалы и методы Вирус. МПВ птиц штамм «PV03-B», 5 пассаж в культуре клеток Vero с инфекционной активностью 7,0 lg ТЦД 50 /см 3 . Культура клеток. Для культивирования МПВ птиц и определения его инфекционной активности использовали перевиваемую культуру клеток почки африканской зеленой мартышки (Vero). Среды и растворы. В качестве ростовой среды при культивирова- нии культуры клеток Vero использовали полусинтетическую суспензи- онную питательную среду ПСС с добавлением 10% сыворотки крови КРС, рН 7,0 – 7,1. В качестве поддерживающей среды для выращивания вируса исполь- зовали питательную среду ПСС с добавлением 2% инактивированной при 58ºС в течение 20 минут сыворотки крови КРС, рН 7,5 – 7,6. Монослой культуры клеток отмывали солевым раствором Хенкса, рН 7,1 – 7,2. Доза инфицирования составила 0,5 ТЦД 50 /кл. За титр вируса считали наивысшее его разведение, вызывающее четкое цитопатическое действие (ЦПД) в 50% инфицированной культуры клеток Vero. Титр вируса выра- жали в lg ТЦД 50 /см 3 и рассчитывали по методу Кербера в модификации Ашмарина. В качестве стимуляторов роста МПВ птиц использовали полионы в дозах: протаминсульфат 50 и 100 мкг/см 3 ; диметилсульфоксид (ДМСО) 1%; гепарин 30 ЕД/см 3 ; трипсин 20 и 30 мкг/см 3 ; ДЕАЕ-декстран 30, 40 и 50 мкг/см 3 . Стерильность вируссодержащего сырья определяли в соответствии с ГОСТ 28085-89. Контроль клеток и сыворотки на наличие микоплазм проверяли мето- дом высева на 0,3% полужидкий агар PPLO. Культуру клеток Vero готовили по разработанному в ФГУ «ВНИИЗЖ» регламенту, используя посевную концентрацию клеток 100-120 тыс/см 3 . Культуру выращивали в матрасах емкостью 1,5 дм 3 в течение 3 суток при температуре 37,5±0,5ºС в стационарных условиях до формирования сплошного монослоя. Перед внесением полионов ростовую среду из матрасов сливали. Мо- нослой клеток дважды отмывали раствором Хенкса. Для опыта формировали 2 группы (по 3 шт.) матрасов. В 1-й группе на отмытый монослой клеток за 4 ч до заражения вноси- ли полионы, инокулят удаляли, а культуру клеток инфицировали вирусом. Элек ронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека