NED373390NED

172 Актуальные вопросы болезней птиц и других видов животных кур (DF-1), почек детенышей хомяка (BHK-21), эмбриона макаки-резус (МА-104), детенышей обезьяны (BGM-70), африканской зеленой мар- тышки (Vero). В настоящее время вакцины против МПВИ готовят, в основном используя перевиваемую культуру клеток Vero. Но часто перевиваемые клеточные линии бывают контаминированы микоплазмами. Поэтому возникла необходимость получения альтернативной культуры, в каче- стве которой использовали первичную культуру клеток куриных фи- бробластов (КФ). Целью исследований явилось изучение особенностей репродукции МПВ птиц штамм «PV03-B» в первичной культуре клеток КФ. Материалы и методы Вирус. МПВ птиц штамм «PV03-B», адаптированный к первичной куль- туре клеток КФ, 10 пассаж с инфекционной активностью 7,0 lg ТЦД 50 /см 3 . Культура клеток. Для культивирования МПВ птиц и определения его инфекционной активности использовали первично-трипсинизированную культуру клеток КФ, полученную из 12-суточных SPF-эмбрионов кур фирм Hy-Vac (США), Lohmann (Германия). Трипсинизацию эмбрионов проводили по общепринятой методике. Посевная концентрация клеток составляла 0,6-0,7 млн/см 3 . Культуру клеток выращивали в течение 1, 2, 3 и 4 суток. Питательные среды и растворы. В качестве ростовой среды исполь- зовали полусинтетическую монослойную питательную среду ПСП с 10% сыворотки крови КРС, рН 7,0 – 7,1. В качестве поддерживающей среды использовали питательную среду ПСП с 2% инактивированной сыворотки крови КРС, рН 7,3 – 7,5. Монослой культуры клеток отмывали солевым раствором Хенкса, рН 7,1 – 7,2. Трипсинизацию куриных эмбрионов проводили 0,25% раствором трипсина, рН 7,5. Для предотвращения бактериального пророста сред и растворов до- бавляли антибиотики в общепринятой дозировке. Сосуды и установка. Культивирование культуры клеток КФ и МПВ птиц проводили в роллерных сосудах ёмкостью 3 дм 3 при темпе- ратуре 37,5±0,5ºС. Скорость вращения сосудов на установке стеллажно- ярусного типа при выращивании клеток составила 4-6 об/час, при куль- тивировании вируса в круговом монослое первичной культуры клеток КФ – 10-12 об/час. Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека