ЭлБиб

35 / 64

Виноделие и
иноградарство 2/2015 33
виноГРАДАРСТВО
Ампело-генетический скрининг
перспективных столовых и технических
сортов и протоклонов винограда1
Л. Трошин, д-р биол. наук, профессор; А. Милованов, аспирант; А. Звягин
Кубанский государственный аграрный университет
Введение. Достаточно консерва‑
тивное население нашей страны, при‑
выкшее к стандартным маркам вин,
с каждым годомпотребляет все больше
и больше винодельческих продуктов.
Один из путей решения данной проб-
лемы — улучшение существующих
традиционных сортотипов винограда
(как Каберне, Пино, Рислинг).
Совершенствование столовых и тех‑
нических сортовмыпроводилина осно‑
ве клоновой селекции, предусматри‑
вающей фенотипический отбор в по‑
пуляции сорта плюс-трансгрессивных
протоклонов и их молекулярно-
генетический анализ [1–13].
Молекулярныемаркерыимеютогром‑
ныйпотенциалдляпоиска генетических
различий между генотипами и выявле‑
нияразнообразия среди генотипов.
Для данных исследований SSR-
маркерынаиболееподходятиз‑заихко‑
доминантности, большого числа повто‑
ров, высокой частотыи обилия в селек‑
тивно нейтральной области.
Для винограда создаются высокона‑
сыщенные микросателлитные карты.
Данные маркеры оказались полез‑
ными для установления личности ге‑
нотипов, фингерпринтинга и анализа
разнообразия исследуемых сортов.
Материалы и методы. Для анали‑
за отбирали листья сортов и прото‑
клонов винограда.
Образцы для молекулярно-
генетического анализа отбирали
на участках учхоза «Кубань» Ку‑
банского госагроуниверситета и его
филиалов, в насаждениях АФ «Фа‑
нагория» и «Южная» Темрюкского
района Краснодарского края.
Для сохранения листья исследуе‑
мых генотипов помещали в моро‑
зильную камеру при –20 °С.
ДНК из свежих листьев выделяли
модифицированнымСТАБ-методом[2,
5, 12]. ПЦР проводили по параметрам,
описаннымвмонографииА.С. Звягина
«Молекулярно-генетические исследо‑
вания полиморфизма винограда» [13].
Для анализа генетического разноо‑
бразия использовали 6 нейтральных
микросателлитных маркеров (прайме‑
ров):
VrZag62;
VrZag79;
VVMD5;
VVMD7;
VVMD27 и VVS2.
Результаты исследований пред‑
ставлены в виде фотографий фо‑
реграмм (рис. 1) и таблицы с дан‑
ными, полученными после их ана‑
лиза.
В блоке «Алиготе» контролем слу‑
жил типичный по фенотипу прото‑
клон Алиготе 7–7;
протоклон Алиготе 7–10 по микро­
сателлиту VrZag62 отличается
от предыдущего на 10 нуклеотидов
по обоим локусам;
по VrZag79 на 16 нуклеотидов;
не отличается по VVS2, на 30
и 22 нуклеотида по VVMD5, на 15
нуклеотидов по VVMD7, а аллель
VVMD27 не амплифицировалась
у Алиготе 7–10 (рис. 2).
В группе «Мерло» контролем был
французский сорт-клон Мерло 348.
От него по локусу VrZag62 протоклон
Мерло 10–8 не отличается;
протоклон Мерло 10–9 отличается
на 8 и 4 нуклеотида;
по локусу VrZag79 Мерло 10–8 от‑
личается на 35 и 15 нуклеотидов;
Мерло10–9 —на23и27нуклеотидов;
по локусу VVS2 соответственно
на 15 и 24 нуклеотида; 8 и 6 нуклео‑
тидов, по локусу VVMD5 — на 9 и 7
нуклеотидов;
по локусу VVMD7 соответственно
на 4 нуклеотида и 8 нуклеотидов;
по локусу VVMD27 Мерло 10–8,
как и Мерло 10–9, отличается на 14
и 16 нуклеотидов.
Вблоке «Каберне Совиньон» контро‑
лем выбрали французский сорт-клон
Каберне Совиньон 217. У образца Ка-
берне Совиньон 210–8 не амплифици‑
ровались аллели VVS2 и VVMD27.
От контрольного образца по ло‑
кусу VrZag62 отличаются прото‑
клон Каберне Совиньон 210–4 на 12
нуклеотидов;
Каберне Совиньон 210–8 — на 10
и 14 нуклеотидов, Каберне Мысхако
(К-С 15) — на 6 и 10 нуклеотидов;
Кабернек — на 8 и 8 нуклеотидов,
по локусу VrZag79 соответственно
на 28 и 38 нуклеотидов, на 20 и 20
нуклеотидов, на 33 и 33 нуклеотида,
на 18 и 5 нуклеотидов;
по локусу VVS2 Каберне Сови-
ньон 210–4 отличается на 11 и 4
нуклеотидов;
Каберне Мысхако (К-С 15) — на 17
и 21 нуклеотид, по локусу VVMD5
Каберне Совиньон 210–4 отличается
на 9 нуклеотидов;
Каберне Совиньон 210–8 — на 4
нуклеотида, Каберне Мысхако
(К-С 15) — на 32 и 12 нуклеотидов;
УДК 634.8
1Доклад к европейскому совещанию ампело‑
графов ECPGR Vitis Working Group, Лиссабон
Рис. 1. Электрофореграммы локусов VrZag62 ( а) и VVMD5 (б)
а б Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека