ЭлБиб

ИЗОФЕРМЕЫТНЫЙ АНАЛИЗ В СЕЛЕКЦИИ ЯГОДНЫХ

КУЛЬТУР

УДК 634.1:577.112:575

JLB. Голышкина

ГНУ Всероссийский НИИ селекции плодовых культур.

Орел, 302530,

Россия

По целому ряду достоинств изоферментные маркерные системы

являются быстрым и надежным способом генотипирования сельскохо

зяйственных растений для решения практических задач селекции

(Глазко, Созинов, 1993). Однако маркерные свойства изоферментов

можно использовать при условии решения методических вопросов и

изучения закономерностей генетического контроля. Полиморфизм ря

да ферментных систем, достаточный для использования в селекцион

ной практике, выявлен у многих плодовых культур, и отрывочные дан

ные представлены по ягодным культурам (Nehra, 1991; Cousineau,

1992; Дунаева и др., 2004; Голышкина, 2005).

Задача наших исследований заключалась в изучении ряда фер

ментных систем у черной смородины и малины, целью которых было

выявление полиморфных вариантов, тканеспецифического изменения

электрофоретических спектров и возможность использования их в ка

честве маркерных систем.

Объектом исследования служили 6 сортообразцов черной сморо

дины и 2 малины из коллекции ВНИИСПК. Навеску растительного

материала (ростовые почки и молодые растущие листья в начале веге

тации) экстрагировали в растворе 0,01 М трис-глицинового буфера pH

8,6, содержащего 0,1% аскорбиновой кислоты, солянокислого цистеи

на, 1% полиэтиленгликоля, 8% поливинилпирролидона (40 000), 20%

глицерола, 0,5% Тритона Х-100, 14 мМ - меркаптоэтанола. Соотноше

ние навески и экстрагирующего раствора было 1:10. После центрифу

гирования к 100 мкл экстракта добавляли 5 мкл 0,001% раствора бром-

фенолового синего в 40% сахарозе и сразу использовали для электро

фореза. В одну лунку вносили 15 мкл экстракта для анализа ПЕР, 20-30

мкл - для Эст, ААТ, ГДГ, МДГ, АДГ, ИДГ, ФГИ, ФГМ, Вертикальный

диск-электорофорез в пластинках ПААГ (1-1,5 мм) - по Дэвису; кон

центрация разделяющего геля - 7,5%. Продолжительность электрофо

реза в зависимости от подвижности фермента составляла 3,5-5 ч при

160 в. Гистохимическое окрашивание проводили по Левитису (1986).

Каждый сорт анализировали по всем ферментным системам в двух

пятикратной повторности по индивидуальным растениям.

Исследовался комплекс ферментов, соответствующих требовани

ям, предъявляемым к белковым маркерам: пероксидаза (ПЕР), эстераза

Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека