NED360717NED

На клевере луговом OPR-16 продуцировал менее отчетливые спектры, амплификация была слабовыраженной, видимо, для тестируе­ мой популяции неудачным оказался выбор исходного праймера (низкий уровень сиквенс-гомологии с образцом ДНК). Однако и в этом случае принцип использования праймеров с дополнительным нуклеотидом оказался достаточно эффективным. Результаты экспериментальных ПЦР на клевере луговом и лю­ церне подтверждают, что эффективность использования данного метода зависит от индивидуальных комбинаций «праймер — образец ДНК» та­ ким же образом, как и в обычном RAPD-анализе, но надежность полу­ ченных маркеров существенно выше. Мы смогли получить высоковос­ производимые маркеры, менее чувствительные к изменению режима амплификации в сравнении с исходными RAPD-маркерами. Модифици­ рованный метод более трудоемок, но позволяет создать специфичные праймеры из исходных рандомных и повысить качество обмена инфор­ мацией по RAPD-анализу между лабораториями. Заключение. Предложен способ повышения надежности RAPD-маркеров на основе принципа избирательной амплификации ДНК, заключающийся в гибридизации ее с помощью двух праймеров с дополнительным се­ лективным нуклеотидом и увеличении температуры отжига. Эти моди­ фикации способствовали повышению специфичности реакции и ста­ бильности полученных ПЦР-продуктов. При эффективном выборе ком­ бинаций «праймер — образец ДНК» можно получить высоковоспроиз­ водимые маркеры, менее чувствительные к изменению условий реакции в сравнении с исходными RAPD-маркерами. Метод может служить по­ лезным инструментом для анализа генетической структуры популяций, идентификации и маркирования сортов и признаков, для разработки ге­ нетических карт, однако, не исключено, что потребуются дальнейшие исследования по его оптимизации применительно к различным видам сельскохозяйственных культур. Литература 1. Хавкин Э. Е. Молекулярные маркеры в растениеводстве // Сельскохозяйственная биология. - 1997. - № 5. - С. 3-20. 2. Genetic markers and the selection of quantitative traits in forage grasses / M. D. Hayward [et al.] // Euphytica. - 1994. - 77: 269-275. 3. ДНК-маркирование селекционно-ценных признаков клевера лугового / Н. Н. Козлов [и др.] // Доклады Российской академии сельскохозяйственных на­ ук. - 2 0 0 6 .-№ 3. - С. 12-15. 185