ЭлБиб

УДК. 576.37.7.086.83:612.014

КАРИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НЕКОТОРЫХ

МЕЖВИДОВЫХ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТУР КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ

Л.П.Дьяконов, Т.В.Гальнбек, А.Н.Сафина, А.С.Симонова, Н.Б.Савенко,

И.К.Абдрахманов, П.М.Кленовицкий*

Всероссийский НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко,

г. Москва, Россия

Всероссийский НИИ животноводства, п. Дубровицы, Россия

Гибридизация клеток животных - перс

пективный метод клеточной инженерии, по

зволяющий получить культуры клеток,

обладающие полезными свойствами (чув

ствительность к вирусам, продукция физио

логически активных веществ и др.).

Одной из проблем культивирования ги

бридных культур клеток является нестабиль

ность кариотипа, сегрегация хромосом и,

как следствие, утрата некоторых биологиче

ских свойств.

В лаборатории клеточной биотехноло

гии ВИЭВ получены межвидовые гибридные

культуры клеток: почка свиньи хлимфоциты

коровы (СПЭВ ТК-хЬК-Д5), почка свиньи х

лимфоциты лошади (СПЭВ ТК- х ЛЛ - A4L)

(Дьяконов Л.П., Тугизов Ш.М., Майджи

Е.В., 1985-88), почка овцы х лимфоциты и

спленоциты кролика (ПО ТК- хЛК, ПО ТК-

х СК), почка овцы х бета-клетки поджелу

дочной железы кролика (ПО ТК- х р -кр) и

др. (Симонова А.С., Савенко Н.Б., Дьяконов

Л.П., Гальнбек Т.В., Куликова И.Л., 2001-

2004).

Представляло интерес изучить состоя

ние кариотипа длительно культивируемой и

хранившейся 17 лет в жидком азоте (-196°С)

культуры клеток A4L (свинья хлошадь) и не

давно полученных культур клеток ПО ТК- х

ЛК (овца х кролик), ПО TIC- х р кр (почка

овцы х р -клетки кролика).

Дифференциальную окраску хромосом

проводили по методу Романовкого-Гимза.

Метафазные пластинки исследовали в ком

пьютерной системе ВидеоТест- Карио 3,1.

Анализ показал, что соотношение хро

мосом в культуре A4xL вариабельно. Ни од

на метафазная пластинка не содержала пол

ного набора хромосом партнеров (38+64).

Количество хромосом составляло от 35 до

78. модальный класс при подсчете 50 мета-

фазных пластинок был в пределах - 26-42

хромосомы.

При наличии 78 хромосом примерно

50% составляли хромосомы свиньи, а 50%

хромосомы лошади. Утеряны 24 акроцен-

трических хромосомы. В метафазных пла

стинках, содержащих 35-39 хромосом прео

бладающими были хромосомы свиньи. Чи

сло хромосом лошади составляло всего 3-

5%. Некоторые клетки содержали только

хромосомы свиньи, однако, они соответ

ствовали гибридным клеткам, как показало

культивирование в среде ГАТ. В популяции

клеток, растущих в суспензии, число хромо

сом составило 51-82. Культурально-морфо-

логически гибридная культура A4xL сохра

няла исходные характеристики и была

представлена как клетками лимфоцитопо

добного типа, характерными для лимфоци

тов лошади, так и эпителиоподобными клет

ками, близкими по морфологии клеткам

СПЭВ. Методом направленной селекции бы

ли получены популяции культур с преобла

данием лимфоцитопо-добных клеток с пони

женной адгезивностью.

Культура клеток овца х кролик (ПО ТК-

х ЛК), которая после гибридизации прошла

29 пассажей, отличалась большей стабильно

стью кариотипа, т.е. большинство клеток

имело равное количество хромосом партне

ров. Число хромосом составило 88-120.

Идентифицировали наличие двуплечных

хромосом кролика и овцы. Видовая диффе-

635

Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека