ЭлБиб

УДК 616.081.42-078.73

ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ ПРИ ИММУНИЗАЦИИ

ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЁЗА

В.С.Бронников, Г.Н.Плужникова, Т.Г.Попова

Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллёза

и туберкулёза животных, г. Омск, Россия.

При бруцеллёзе усилия направлены на

создание высоко иммуногенного средства

специфической профилактики с минималь

ной серологической активностью. Но в

практике необходимо иметь способ контро

ля проведённой вакцинации. А инструктив

но обязательные диагностические исследова

ния, нацеленные на выявление больных, не

учитывают состояние специфического им

мунного статуса.

Мы попытались использовать широко

применяемый в мире иммуноферментный

анализ (ИФА) для контроля иммунизации

крупного рогатого скота живой и химиче

ской противобруцеллёзными вакцинами,

определить оптимальный срок исследова

ния, возможность использования высушен

ных сывороток, изучить иммунные профили

отдельных животных и сравнить полученные

результаты с показателями реакции агглю

тинации (РА).

Наша цель не предполагала использова

ния ИФА основанного на применении в си

стеме моноклональных антител. Высокоспе

цифичного варианта, позволяющего диффе

ренцировать контаминированных вирулент

ной культурой от вакцинированных. Вари

ант, применённый в нашей работе, нацелен

на повышение чувствительности за счёт уча

стия в тест-системе комплексного антигена

имеющего высокую степень сродства с хими

ческой вакциной.

Твёрдофазный ИФА проводили в пло

скодонных полистироловых микропланше

тах. Липополисахарид (ЛПС) вирулентного

штамма бруцелл инкубировали в концентра

ции 10 мкг/мл сутки при 4?С в 0,1 М карбо

натном буфере (pH 9,4). Несвязавшийся ан

тиген отмывали трёхкратно фосфатным бу

фером (pH 7,2) содержащим 0,05% твин 20.

Затем в течение часа при 37? С проводили

специфическую реакцию с разведениями ис

пытуемых сывороток. Опять трёхкратно от

мывали. Инкубировали с антивидовым ко

нъюгатом в течение часа при 37° С, отмыва

ли и вносили субстрат - 5-аминосалицило-

вуЮкислоту. Результаты реакции определя

ли по оптической плотности образца.

При проведении РА с единым бруцеллё

зным антигеном по общепринятой методике

отдельные ареактивные животные выявлены

во все сроки после иммунизации живой вак

циной.

Применение БХВ стимулировало нали

чие этой реакции у всех животных через 15-

30 дней и угасание её к 45-му дню.

При исследовании восстановленных сы

вороток в РА реагировало лишь 20% образ

цов.

ИФА выявил наличие противобруцеллё-

зных антител во всех исследуемых образцах.

Через 15 дней после иммунизации БХВ диаг

ностический титр составил 200 ME, через 30

дней - 1600 ME, а через 45 дней вырос до

6400 ME.

Живая вакцина стимулировала несколь

ко меньший уровень реакций. Так через 30

дней титр составил 400 ME, а через 45 дней -

800 ME. Это наглядно видно в иммунохими-

ческих профилях представленных в диаграм

ме.

Таким образом ИФА на основе ЛПС

бруцелл может быть использован для мони

торинга специфического иммунного статуса

вакцинированного крупного рогатого скота.

Профили реакции в ИФА индивидуальны.

Высушивание сывороток не снижает их

серологической активности определяемой в

165

Электронная Науч ая СельскоХозяйственная Библиотека