ЭлБиб

вать ложноположительные реакции, быть безопасным для исследователя.

Для очистки культур хламидий использовали дифференциальное и на

градиенте сахарозы центрифугирование суспензий инфицированных жел

точных оболочек куриных эмбрионов. Готовили ступенчатый (с шагом 5

%) градиент сахарозы от 5 до 55 %.

;

Твердофазный ферментзависимый анализ выполнялся общеприняты

ми методами. ИФА ставили на микротитрационных планшетах из полисти

рола отечественных, изготовленных на ПО ВНИИ медицинской техники (п

Москва) и импортных - фирмы Linbro (США). Результаты учитывали визу

ально по интенсивности окрашивания и инструментально на фотометрах

фирмы Titerter модификации Muitiskan при длине световой волны 492 нм.

Для сравнения в ИФА были получены и испытаны лизатные антигены

хламидий. В качестве детергентов использовали: додецилсульфат натрия

(ДСН), дезоксихолат натрия (ДХН), твин-20, хлороформ (ХФ), тритон Х100.

Позитивные сыворотки получали путем иммунизации собак и кошек

возбудителем хламидиоза. Инфекционный материал вводили внутрибрю-

шинно двукратно с интервалом 7 дней.

Негативные сыворотки подбирали из числа проб, полученных от здоро

вых животных. Предварительно эти сыворотки исследовали в РСК и РИГА.

При центрифугировании в ступенчатом градиенте сахарозы было по

лучено 13 фракций антигена, из которых были изготовлены путем ультра

звуковой обработки антигены для испытания в ИФА.

Анализ результатов свидетельствует, что наиболее специфичным явля

ется антиген, полученный из фракции, собранной в 35 %-й сахарозе ступен

чатого градиента. Коэффициент его специфичности составлял при концен

трации антигена 15,0 и 6,5 мг/мл соответственно 7,2 и 7,1.

Тестирование в ИФА антигенов, полученных обработкой бактериаль

ной массы различными детергентами, показало, что наибольшая оптичес

кая плотность в лунках с позитивными сыворотками отмечена при исполь

зовании препаратов, экстрагированных хлороформом и тритоном X 100.

Проведенные исследования позволили подобрать эффективные режи

мы очистки и лизиса антигенов хламидий при конструировании иммуно-

ферментных тест-систем.

339

Научная элект онная библиотека ЦНСХБ