ЭлБиб

Материалы и методы

В работе использовали четырехсуточные проростки

ранжированных по светочувствительности и холодоустой

чивости сортов озимой пшеницы. РНК выделяли безфе-

нольным методом. Проростки разрушали в присутствии

жидкого азота. Экстракцию проводили пятью объемами

буфера: 0,2 М Трис-HCl, pH 8,5 0,02 М МдС12, 2%. DDS-Na.

После осаждения дебриса центрифугированием к супер

натанту добавляли КС1 до 0,3 М, образующий с DDS-Na

нерастворимый осадок. В осветленный супернатант вно

сили LiCl до концентрации 4М и раствор инкубировали 4-

16 часов при 4°. Осадок растворяли в бидистиллирован-

ной воде, осветляли, и на спектрофотометре определяли

концентрацию суммарной РНК.

Метод определения степени распада рРНК in vitro. В

инкубационный раствор, содержащий 10 мМ Трис-HCl,

pH 7,2, 10 mM МдС12, 100 mM КС1, вносили РНК до конеч

ной концентрации

0,2

мг/мл и инкубировали

мин. при

65°. После инкубирования к реакционной смеси добавля

ли LiCl до 4М и выдерживали 4-16 часов при 4°. Осадок

отделяли центрифугированием. Оптическая плотность су

пернатанта при 260 нм являлась критерием степени рас

пада РНК.

Результаты и обсуждение

Распад рРНК удалось индуцировать in vitro при про

греве препаратов, что было выявлено с помощью гель-элек

трофореза и количественно охарактеризовано спектрофо

тометрическим методом.

Изучаемый эффект оказался достаточно сложным. В

нём мы обнаружили два различных молекулярных меха

низма распада. В одном случае были показаны:

— зависимость степени распада от концентрации РНК

в инкубационном растворе; возможность предотвратить

распад переосаждением РНК этанолом с ацетатом Na; спо

собность необработанных молекул вызывать распад ста

бильных РНК при смешивании (рис. 1).

528

Научная электронная б лиотека ЦНСХБ