ЭлБиб

Непрямой вариант постановки ИФА проводили по общепри

нятой схеме. Опытные и контрольные пробы сывороток тестиро

вали методом двукратных разведений, начиная с 1:20. В работе

использовали коммерческий препарат антисвиных антител, ме

ченных пероксидазой хрена (Институт им. Н.Ф. Гамалеи). Все

реагенты вносили в обьеме 50 мкл на лунку и инкубировали с

помощью шейкера 1 час при 37°С. Индикацию проводили внесе

нием субстрата АБТС, учет реакции - спектрофотометрически

на ридере

(

«Униплан№», г. Москва) при длине волны 405 нм.

Титром сыворотки считали ее последнее разведение, в котором

значение оптической плотности в 2,0-2,1 раза превышало оптичес

кую плотность в лунках с контрольной отрицательной сывороткой.

Специфичность антигена проверяли в перекрестной реакции

с референтными сыворотками крови свиней, полученными на ви

русы РРСС, болезни Ауески, диареи КРС. Результаты сравни

тельной оценки разработанной тест-системы на специфичность

показывают, что активность антигена с гетерологичными сыво

ротками не превышала фоновый уровень (реакция с неиммунной

сывороткой).

Разработанную тест-систему ИФА использовали для детек

ции антител в сыворотках крови от вакцинированных и подозре

ваемых в заболевании свиней. Уровень антител у невакциниро-

ванных животных составлял в ИФА титр <1:20 и в PH был от

рицательным. Титры антител на 21-й день после вакцинации со

ставили 1:40-1:80 в ИФА и 4,0-5,5 iog

в PH. Через 14 дней

после контрольного заражения уровень антител составил 1:80-

1:160 в ИФА и 5,5-6,5 log

в PH. Максимальные титры антител

в сыворотках переболевших животных в PH > 6,5 log

и соот

ветственно 1:160-1:320 в ИФА.

Результаты тестирования - 20 проб сывороток крови свиней

различных групп в непрямом варианте ИФА. Реакции нейтрали

зации и коммерческом тесте Chekit-CSF-Sero показали, что раз

работанная тест-система не уступает по чувствительности рефе

рентному тесту, но имеет более высокую специфичность за счет

использования рекомбинантного белка gp 55.

Таким образом, разработанная иммуноферментная тест-систе

ма на основе рекомбинантного белка gp55 позволяет детектиро

вать в сыворотках специфические антитела к вирусу КЧС. Пред

ложенный тест является воспроизводимым, результаты реакции

имеют выраженную специфичность и совпадают с результатами

реакции нейтрализации. Разработанная тест-система может быть

использована для оценки иммунного статуса свиней при прове

дении массовых обследований.

Научная электронн я библиотека ЦНСХБ