Биохимия белковых веществ

первоначальных объемах NaOH первоначальной концентрации. После нагревания на водяной бане до 90° и охлаждения до 18—20° проводилось осаждение белка при помощи 10%-ного раствора НС1 при pH = 4,7. Эта операция растворения в 7г%-ном NaOH и осаж­ дения при pH = 4,7 повторялась до пяти-семи раз. После оконча­ тельного осаждения белок фильтровался на бумажном фильтре и отмывался от кислоты до полного отсутствия ее в промывной жид­ кости. Далее, белок протирался через сито и заливался спиртом. Затем снова следовала фильтрация, промывка на фильтре 96°-ным спиртом и притирание со спиртом сквозь сито, после чего белок помещался в экстракционную гильзу и вкладывался в аппарат Сокслета, где обрабатывался в течение 3—4 суток абсолютирован­ ным при помощи прокаленного CUSO 4 спиртом до возможно полно­ го удаления воды. Вслед за этим он подвергался в том же аппа­ рате Сокслета обработке серным эфиром до удаления спирта (2 су­ ток). Полученный таким образом препарат чистейшей казеиновой протокислоты растирался в ступке, освобождался от эфира, про­ сеивался через сито № 9 и оставлялся в эксикаторе над H 2 SO 4 и над СаСЬ в течение 14—15 дней для удаления остатка влаги. Вы­ деленный препарат подвергался первой стадии изучения. Метод получения чистейшей гороховой белковой протокислоты Берется до 1 кг чистого, ощелушенного (без оболочек) обыкно­ венного гороха. Семена крупно дробятся и помещаются в аппарат Сокслета для обработки спиртом и эфиром до исчезновения окрас­ ки в отработанных жидкостях. Обезжиренная и обесцвеченная круп­ ка заливается 2% -ной СН 3 СООН в тройном объеме по отношению к объему семян и при помешивании настаивается в течение 2 су­ ток. Кислота после этого сливается, и крупка промывается водой до отсутствия кислой реакции. После этого крупка заливается NaOH до щелочной реакции, и после прибавления NaOH по расче­ ту на белок (1220 — эквивалентный вес) последний извлекается в течение 2 суток при помешивании. Почти вся основная масса горо­ ховой белковой протокислоты переходит в щелочную вытяжку. Для большего выхода белка вытяжку NaOH повторяют. Вытяжка, от­ деленная от крупки, нагревается на водяной бане до 90°. Из охлаж­ денной до 20 ° вытяжки белок осаждается при помощи 10 %-ной НС1 при pH = 4,7. Отфильтрованный на ватном фильтре и промытый белок снова растворяется в 7г%-ном растворе NaOH с расчетом объема до V 2 V 0 белка и нагревается на водяной бане до 90°. Охла­ жденный раствор протеината белка осаждается при pH = 4,7 10%-ным раствором НС1 до пяти-семи раз. Окончательно осаж­ денный белок отфильтровывается через бумажную массу на фильт­ ре, промывается водой до отсутствия кислой реакции и протирает­ ся сквозь сито с водой. Снова помещается на фильтр, промывается спиртом и оставляется в 96°-ном спирте на сутки при помешива­ нии. После этого снова отфильтровывается, протирается сквозь сито со спиртом и помещается в гильзу аппарата Сокслета, где и 274 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека