NED379019NED

7 включал предварительную денатурацию при 95 ºС в течение 2 мин.; д а- лее 40 циклов с повторами: денатурация при 95 ºС — 30 сек., отжиг праймеров при 60 ºС — 45 сек., синтез при 72ºС — 2 мин., завершаю- щий цикл — 72 ºС в течение 5 мин. Продукты ПЦР анализировали по- сле электрофореза в 1,4 % агарозном геле, окрашивания в 0,5 мг/мл рас- творе бромистого этидия и визуализации под ультрафиолетовым све- том. Размер амплифицированных фрагментов ДНК определяли путем сравнения с маркером молекулярной массы (100 bp DNA Ladder). Химический анализ растительных образцов проведен в лаборато- рии массовых анализов ФГБНУ «ВНИИ кормов им. В. Р. Вильямса» в соответствии с общепринятыми методиками [5; 6]. Результаты исследований. С целью получения растений с по- вышенной устойчивостью к неблагоприятным условиям окружающей среды нами созданы с помощью агробактериальной трансформации трансформированные растения-регенеранты люцерны изменчивой Medicago varia (образец МН2) с геном Fe-SOD (супероксиддисмутазы). Для идентификации трансгенных форм из 23-х созданных расте- ний-регенерантов (с целевым геном) 20 были проанализированы мето- дом ПЦР с использованием праймеров FeS1 и FeS2, подобранных к по- следовательности гена Fe-SOD. В результате получены электрофорети- ческие спектры продуктов амплификации разной интенсивности — от четких до слабовыраженных, едва различимых (рисунок). Вероятно, М 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 Результаты ПЦР анализа образцов люцерны изменчивой МН2 с праймерами FeS1/FeS2 М — молекулярный маркер (100 bp); 1 — контроль (вода); 2 — контрольное нетрансгенное растение; 3 — 22 анализируемые растения люцерны изменчивой. Стрелкой указана локализация фрагмента амплифицированной ДНК с Fe–SOD (645 bp).