1-248.indd

92 Болезни сельскохозяйственных животных гибридную культуру клеток А 4 ×С 2 (свинья × свинья), которые полу- чали из музея культур клеток ФГБУ «ВНИИЗЖ». При работе с культурами клеток использовали питательную среду Игла с добавлением 5% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота и содержанием 50 мкг/см 3 гентамицина и 0,3 мг/см 3 глютамина, для промывания монослоя клеток – фосфатно-буферный раствор с рН 7,0-7,4. Титрование вируса КЧС проводили в различных культурах кле- ток при помощи реакции прямой иммунофлюоресценции (РПИФ). Для титрования вируса КЧС использовали 2-3-суточный монослой культур клеток, выращенный в лунках 96-луночных планшетов. Ин- фекционный титр вируса вычисляли по методу Кербера и выражали в lg ККИД 50 /0,15 см 3 . При постановке РПИФ использовали моноклональные антитела, полученные на участок гликопротеина Е2 вируса КЧС, меченные ФИТЦ (FITC anti-CSFV BFAV B360, фирмы «EuroClone» и Pestivi- rus–СSF mAb WH 211, Veterinary Laboratories Agency Scientific). Био- логические препараты исследовали с помощью инвертированного люминесцентного микроскопа ULWCD 0,30 Olympus модели СКХ41, использовали окуляр ×10, объектив ×10; окуляр ×10, объектив ×60. Результаты и обсуждение Тестирование проб начинали с приготовления мазков-отпечатков и испытания их при помощи РПИФ. В результате проведенных ис- следований пробы крови №№ 1, 2 оценили на 2 креста, пробы селе- зенки №№ 3, 4 – на 3 креста, № 5 – на 4 креста. При исследовании данных проб в ПЦР получили положительные результаты во всех образцах крови и патологического материала. После того как во всех препаратах мазков-отпечатков в РПИФ был получен положительный результат на КЧС, из 3 проб патоло- гического материала приготовили 33%-ные суспензии, которые ис- пользовали, вместе с пробами крови, для инокуляции в различные первичные и перевиваемые культуры клеток. Результаты исследова- ния представлены в таблице. Из данных таблицы видно, что в исследуемых первичных и перевиваемых культурах клеток можно получить накопление вируса КЧС в титрах, начиная от 1,25±0,25 до 5,75±0,25 lg ККИД 50 /0,15 см 3 . Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека