1-248.indd

79 Болезни сельскохозяйственных животных зовали питательные среды Игла-МЕМ, ПСП, ПСС, приготовленные по прописям ФГБУ «ВНИИЗЖ», с добавлением 2-5% эмбриональ- ной сыворотки крупного рогатого скота и содержанием 50 мкг/см 3 гентамицина, 2,5 мг/1000 см 3 амфотерицина В и 0,3 мг/см 3 глюта- мина. Для промывания монослоя клеток использовали фосфатно- буферный раствор с рН 7,0-7,4. Определение титра инфекционности вируса КЧС проводили путем его титрования в различных культурах клеток при помощи реакции прямой иммунофлюоресценции (РПИФ). Для титрования вируса КЧС использовали 1-2-суточный монослой культур кле- ток, выращенный в лунках 96-луночных микропланшетов. Инфек- ционный титр вируса вычисляли по методу Кербера и выражали в lg ККИД 50 /0,15 см 3 . При постановке РПИФ на КЧС использовали моноклональ- ные антитела, полученные на участок гликопротеина Е2 вируса КЧС, меченные ФИТЦ (FITC anti-CSFV (Hog Cholera) BFAV B360, фирмы «EuroClone» и Pestivirus – СSF mAb WH 211, Veterinary Laboratories Agency Scientific), на АЧС – специфические ФИТЦ- иммуноглобулины для иммунофлюоресцентной диагностики АЧС (ГНУ ВНИИВВиМ, г. Покров), а также моноклональные ан- титела, полученные на протеин vp72, меченные ФИТЦ (Испания, г. Мадрид) [3, 4]. Результаты и обсуждение Ежегодно в ФГБУ «ВНИИЗЖ» из различных хозяйств РФ посту- пает патологический материал для проведения исследования по вы- делению вирусов КЧС и АЧС в первичных культурах клеток свиней с последующей идентификацией их в реакции прямой иммунофлю- оресценции (РПИФ) и полимеразной цепной реакции (ПЦР). В слу- чае получения положительного результата (в РПИФ и ПЦР) прово- дят исследование чувствительности различных перевиваемых куль- тур клеток к выделенным полевым изолятам вирусов КЧС и АЧС. Согласно «Методическим указаниям по выявлению вируса афри- канской чумы свиней в пробах крови и патологических материалов, отобранных от павших или вынужденно убитых свиней, в реакции прямой иммунофлюоресценции (РПИФ)» [3], исследование по- ступившего патологического материала проводится одновременно Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека