1-248.indd

65 Болезни сельскохозяйственных животных В качестве поддерживающей питательной среды при культиви- ровании вируса КЧС в различных культурах клеток использовали питательные среды Игла-МЕМ, полусинтетическую (ПСП) и синте- тическую (ПСС), приготовленные по прописям ФГБУ «ВНИИЗЖ», с добавлением 2-5% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота и содержанием 50 мкг/см 3 гентамицина, 2,5 мг/1000 см 3 ам- фотерицина В и 0,3 мг/см 3 глютамина. Для промывания монослоя клеток использовали фосфатно-буферный раствор с рН 7,0-7,4. Монослой клеток инфицировали изолятами вируса КЧС с множе- ственностью заражения не менее 0,1-0,01 ККИД 50 /кл и адсорбирова- ли вирус на клетках в течение 1-2 ч при температуре 37 °С. Определение титра инфекционности вируса КЧС проводили путем его титрования в различных культурах клеток при помощи реакции прямой иммунофлюоресценции (РПИФ). Для титрования вируса КЧС использовали 1-2-суточный монослой культур кле- ток, выращенный в лунках 96-луночных микропланшетов. Инфек- ционный титр вируса вычисляли по методу Кербера и выражали в lg ККИД 50 /0,15 см 3 . При постановке РПИФ на КЧС использовали моноклональ- ные антитела, полученные на участок гликопротеина Е2 вируса КЧС, меченные ФИТЦ (FITC anti-CSFV (Hog Cholera) BFAV B360, фирмы «EuroClone» и Pestivirus – СSF mAb WH 211, Veterinary Laboratories Agency Scientific). Биологические препараты исследо- вали с помощью инвертированного люминесцентного микроскопа ULWCD 0,30 Olympus модели СКХ41, использовали окуляр × 10, объектив × 40; окуляр × 10, объектив × 60. Результаты и обсуждение Исследование 6 проб почек начали с приготовления мазков- отпечатков и исследования их при помощи РПИФ на наличие анти- гена вируса КЧС. В результате проведенных исследований все пре- параты оказались положительными на наличие антигена вируса КЧС. Затем из проб патологического материала приготовили 20%-ные суспензии, которые использовали для инокуляции в 10-кратных раз- ведениях в первичные культуры клеток СП, ТС, ТЯ и различные перевиваемые культуры клеток: СПЭВ, ППК, РК-15, А 4 ×С 2 , MARC- 145, Vero, ПСГК, MDСK, RBT, Таурус, MDBK, ВНК-21. Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека