1-248.indd

218 Болезни рыб чены при анализе 10 последовательных пассажей данного изолята вируса ВВК. Таким образом, более раннее и яркое проявление ЦПД наблюда- лось при культивировании изолята вируса ВВК «Оренбург 05/14» в клеточной линии ЕРС при температуре 20 °С. Полученные данные подтверждаются ранее проведенными исследованиями других авто- ров в отношении изолятов вируса ВВК [5, 10]. Для оценки специфичности полученного культурального анти- гена полевого изолята вируса ВВК «Оренбург 05/14» по итогам каждого пассажа проводили ТФ ИФА и РИФ в культуре клеток ЕРС (табл. 2, 3). Как следует из табл. 2 и 3, значения величины P/N для всех исследуемых в ТФ ИФА образцов были больше 2 и после каж- дого пассажа увеличивались, что подтверждает наличие антигена вируса ВВК и рост его концентрации. При проведении РИФ по мере адаптации вируса ВВК к культуре клеток ЕРС и повышения титров накопления антигена наблюдали увеличение количества интенсивно светящихся клеток в инфицированном монослое. Таким образом, по результатам проведенных исследований подтверждена специфич- ность полученного культурального материала изолята вируса ВВК «Оренбург 05/14». Таблица 2 Результаты исследования изолята вируса ВВК «Оренбург 05/14» (культивирование при 15 °С) (n=4) № пас- сажа Титр накопле- ния культу- рального анти- гена вируса, lg ТЦД 50 /см 3 Концентрация ви- русного белка, мкг/мл ТФ ИФА (величи- на P/N) РИФ (коли- чество крестов) ОТ-ПЦР-РВ (значение по- рогового цикла амплифика- ции) по Лоури ТФ ИФА 1 4,84±0,03 5 5,2 2,25 3+ 27,7 2 5,23±0,01 20 25 2,51 3+ 27,2 3 5,79±0,04 40 40 2,93 4+ 25,6 4 6,00±0,03 50 52 3,98 4+ 24,5 5 6,31±0,03 200 220 4,72 4+ 22,3 6 6,51±0,02 300 290 5,46 4+ 20,4 7 6,77±0,03 400 390 6,15 4+ 18,9 8 7,07±0,02 490 495 6,81 4+ 17,6 9 7,18±0,03 800 790 7,43 4+ 16,4 10 7,38±0,03 1400 1380 8,04 4+ 15,3 К- - - - 1,04 - - Электронная Научная СельскоХозяйственн я Библиотека