1-248.indd

213 Болезни рыб контроля использовали референтный штамм вируса ВВК «Яяла» с титром инфекционной активности 7,0 lg ТЦД 50 /см 3 . Указанный штамм был предоставлен сотрудниками «Государственного научно- исследовательского института ветеринарии и сельского хозяйства» (г. Хельсинки, Финляндия). Отбор проб патматериала проводили согласно требованиям, описанным в методических рекомендациях [3]. Культура клеток. Для репродукции вируса ВВК использовали пе- ревиваемую клеточную линию папулезной эпителиомы карпа (ЕРС). Культивирование клеток. В качестве ростовой среды использо- вали культуральную среду DMEM (рН 7,2-7,4) с добавлением 10% фетальной сыворотки крови крупного рогатого скота («Sigma», США), 3% раствора L-глутамина, 0,02М Hepes-буферного раствора и 100 МЕ гентамицина на 1000 см 3 среды. Выращивание монослоя клеток проводили в СО 2 -инкубаторе при температуре 15 и 20 °С. Вирусовыделение из патологического материала проводили в культуре клеток ЕРС в соответствии с Руководством МЭБ [7]. Культивирование вируса ВВК. Репродукцию изолята вируса ВВК «Оренбург 05/14» осуществляли в монослое культуры клеток ЕРС при температуре 15 и 20 °С в течение 10 последовательных пасса- жей. Доза заражения составляла 0,05 ТЦД 50 /кл. Титрование вируса ВВК проводили в монослое клеточной линии ЕРС, выращенном в 96-луночном культуральном планшете. Титр инфекционной активности вируса ВВК вычисляли согласно методу Рида и Менча и выражали в lg ТЦД 50 /см 3 . Определение концентрации антигена вируса ВВК проводили методом Лоури и с помощью твердофазного прямого «сэндвич»- варианта иммуноферментного анализа («TEST-LINE», Чехия). Твердофазный прямой «сэндвич»-вариант иммуноферментного анализа (ТФ ИФА). При постановке реакции использовали коммер- ческие наборы для выявления антигена вируса ВВК в патматериале и суспензии инфицированных клеток («TEST-LINE», Чехия). Ви- русосодержащий материал классифицировали как положительный, если значение величины P/N, которое показывает отношение специ- фического и фонового сигналов, было более 2. Реакция иммунофлуоресценции (РИФ). В работе использовали диагностический набор для обнаружения антигена вируса ВВК в Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека