1-248.indd

186 Биотехнология Таблица 4 Формирование монослоя клеток ФЭК, после криоконсервирования и хранения при минус 150 °С Время хране- ния, мес Длительность формирования монослоя, сут. Степень покрытия рабочей поверхности флакона, % 10-5* 10-10 10-15 20-5 20-10 20-15 10-5 10-10 10-15 20-5 20-10 20-15 0 1 1 1 1 1 1 100 100 100 100 100 100 2 3 3 3 2 3 3 100 100 50 100 100 90 4 3 3 3 3 3 3 100 100 20 100 100 70 6 3 3 искл. 3 3 3 100 100 искл. 100 100 100 8 3 3 искл. 3 3 3 100 100 искл. 100 90 100 10 3 3 искл. 3 3 3 90 100 искл. 100 90 90 12 3 3 искл. 3 3 3 80 80 искл. 80 80 80 * Первая цифра означает процентное соотношение фетальной сыворотки в криокон- сервирующей смеси, вторая – соотношение ДМСО. Из приведённых данных видно, что в большинстве вариантов вре- мя формирования монослоя составляло 3 суток. В течение 6 месяцев хранения во всех вариантах степень формирования монослоя на рабо- чей поверхности флакона составила 100%. При дальнейшем хранении (более 6 месяцев) в некоторых пробах наблюдалось незначительное снижение плотности монослоя до 80-90%. По истечении 12 месяцев хранения во всех образцах степень формирования монослоя на адге- зивной поверхности флакона после размораживания составила 80%. Далее была проведена работа по изучению сохраняемости кле- ток ФЭК при криоконсервировании и хранении в жидком азоте (минус 196 °С). Для приготовления криоконсервирующей смеси было выбрано оптимальное соотношение фетальной сыворотки (20%) и ДМСО (10%), при котором наблюдалась наиболее высокая сохраня- емость клеток во время эквилибрации и замораживания их при темпе- ратуре минус 150 °С. Концентрация клеток до замораживания соста- вила (11±0,1) млн кл./см 3 , а после оттаивания – (7,6±0,2) млн кл./см 3 . Таким образом, сохраняемость клеток при температуре минус 196 °С составила 69%. Полученное значение сходно с показателем, получен- ным для температуры минус 150 °С. После оттаивания и инокуляции в культуральные флаконы монослой ФЭК формировался за 3 суток. Следовательно, применение данного способа криоконсервирования возможно при дальнейших исследованиях. Эле тронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека