1-248.indd

184 Биотехнология Таким образом, 20% концентрация ДМСО в криоконсервирующей смеси является токсичной для клеток ФЭК уже на этапе добавления и первичного контакта, поэтому для проведения дальнейшей работы были выбраны образцы № 1, 2, 3, 5, 6, 7. Таблица 2 Выживаемость ФЭК в результате эквилибрации их с криопротектором и сывороткой № п/п Соотношения криопротекторов в суспензии Концентрация клеток до эквили- брации, млн кл./см 3 Концентрация клеток после эквилибра- ции, млн кл./см 3 1 10% сыворотки, 5% ДМСО 11,0±0,01 11,0±0,01 2 10% сыворотки, 10% ДМСО 11,0±0,02 11,0±0,01 3 10% сыворотки, 15% ДМСО 11,0±0,01 11,0±0,01 4 10% сыворотки, 20% ДМСО 11,0±0,03 6,3±0,04 5 20% сыворотки, 5% ДМСО 11,0±0,02 11,0±0,02 6 20% сыворотки, 10% ДМСО 11,0±0,01 11,0±0,01 7 20% сыворотки, 15% ДМСО 11,0±0,03 11,0±0,02 8 20% сыворотки, 20% ДМСО 11,0±0,02 7,5±0,05 Следующим этапом работы было изучение жизнеспособности клеток ФЭК в зависимости от продолжительности хранения при сверхнизких температурах. Для этого готовили клеточные суспен- зии, добавляли криопротектор с сывороткой, расфасовывали по криопробиркам в объёме 4 см 3 , помещали в термоконтейнер и хра- нили в течение эксперимента в низкотемпературном холодильнике при температуре минус 150 °С. Оттаивание, подсчёт клеток и вы- сев в культуральные флаконы проводили с интервалом в 2 месяца. Размораживание проводили при температуре 26-30 °С. Продолжи- тельность наблюдения данного этапа работы составляла 12 месяцев. Результаты по изучению выживаемости клеток после глубокой за- морозки приведены в табл. 3. Из приведённых данных видно, что защитные свойства были наиболее выражены при добавлении смеси фетальной сыворот- ки и ДМСО в концентрации 20 и 10%, соответственно. Выживае- мость клеток в течение 1 года хранения варьировала от 71 до 53%. Самым неблагоприятным оказалось соотношение 10% сыворотки Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека