1-248.indd

183 Биотехнология живания клеточной суспензии предпочтительно применять первич- но трипсинизированные клетки ФЭК. Было проведено испытание ранее разработанного способа замо- раживания клеток [8]. В ходе проведения работы было установлено, что после оттаивания суспензии выживало 60% клеток (концентра- ция клеток до замораживания составила (2,9±0,1) млн кл./см 3 , после оттаивания – (1,74±0,2) млн кл./см 3 ). При микроскопии клеток после разморозки (увеличение × 20) наблюдали, что погибшие клетки име- ли неопределённую форму, тёмный цвет, наблюдалась деструкция ядра и цитоплазмы. Жизнеспособные клетки после хранения были схожи с клетками в интактной суспензии. Они имели правильную округлую форму, чёткие очертания, светлую цитоплазму, у них чётко просматривались ядро и ядрышки. После подсчёта клеток суспензию разбавили ростовой средой, со- держащей 10% фетальной сыворотки, внесли в культуральные фла- коны по 10 см 3 и инкубировали 4 суток. По истечении первых суток поверхность флаконов была покрыта пролиферирующими клетками на 30%. В течение последующих 3 суток дальнейшего деления при- крепившихся клеток не происходило. Исходя из полученных резуль- татов, можно сделать вывод, что данный способ криоконсервирова- ния не способствует сохранению пролиферативных свойств клеток ФЭК, полученных из эмбрионов SPF-кур-несушек. С целью оптимизации условий криоконсервирования клеток ФЭК были проведены следующие работы: подобраны оптимальные соот- ношения криоконсервирующей смеси; стабилизированы режимы охлаждения и оттаивания; проведено изучение жизнеспособности при длительном хранении при минус 150 °С и непродолжительном хранении при минус 196 °С. Выбор криоконсервирующей смеси ДMСO–сыворотка был сде- лан на основе ранее предложенных концентраций [3, 8] c небольши- ми вариациями. Суспензии ФЭК с выбранными вариантами концен- траций криозащитных веществ были подвергнуты эквилибрации. Результаты работы приведены в табл. 2. Из приведённых данных видно, что снижение концентрации кле- ток после эквилибрации наблюдалось в образцах, содержащих 10% фетальной сыворотки и 20% ДМСО, а также 20% сыворотки и 20% ДМСО. В остальных образцах концентрация клеток не менялась. Электронная На чная СельскоХозяйст енная Библиотека