1-248.indd

182 Биотехнология с суспензией, хранящиеся при минус 150 °C, помещали в жидкий азот. Спустя 72 ч клетки оттаивали в водяной бане при температу- ре 26-30 °C и проводили стандарное исследование по определению пригодности клеток к дальнейшим исследованиям. Изучение чувствительности к вирусам клеток ФЭК, подвергав- шихся криоконсервированию. Испытуемую культуру клеток заража- ли штаммом вируса лейкоза птиц подгруппы J (ALV-J) ALV-J/CLB- 908U 3п (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), штаммом ALV-J ADOL-HCI-P7 3п (Лаборатория онкологии и болезней птиц, США) и штаммом ме- тапневмовируса PV03-B (ФГБУ «ВНИИЗЖ»). Клетки, заражённые ALV-J, инкубировали в течение 12 суток при 37 °С. По истечении срока инкубации титр ALV-J определяли методом предельных разве- дений [9]. Чувствительность клеток ФЭК к метапневмовирусу оце- нивали микроскопически по появлению ЦПД. Продолжительность опыта составляла 12 месяцев. Результаты и обсуждение Жизнеспособность и пролиферация клеток ФЭК в экстремаль- ных условиях напрямую зависит от условий трипсинизации и куль- тивирования. Чтобы оптимизировать потери клеток ФЭК, связанные с криоконсервированием, необходимо было получить достаточ- ное количество суспензии с их высокой концентрацией для отбора жизнеспособных клеток. Изучение жизнеспособности клеток ФЭК позволило оценить возможность получения клеточной суспензии для длительного хранения путём культивирования фибробластов и сбора клеток путём диспергирования монослоя. Для этого была про- ведена работа по вычислению коэффициента выживаемости клеток и их способности к пролиферации на первом пассаже. В ходе проведения исследований посевная концентрация клеток составила (0,93±0,19) млн кл./см 3 . После адгезирования клеток, сме- ны среды и формирования монослоя концентрация диспергирован- ных с монослоя клеток составила (0,19±0,07) млн кл./см 3 , то есть в 5 раз меньше, чем было первоначально инокулировано. Коэффициент выживаемости в таких условиях составил 0,2. Таким образом, было показано, что выросшие клетки ФЭК после посева на ростовую по- верхность обладают слабыми пролиферативными свойствами, лишь 20% клеток участвуют в образовании монослоя, поэтому для замора- Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека