1-248.indd

181 Биотехнология ваний, в качестве криопротектора был использован ДМСО [3, 8]. Полученную после центрифугирования клеточную фракцию ресу- спендировали в бессывороточной среде Лейбовица-Маккоя, затем проводили подсчёт клеток [3]. Далее готовили криоконсервирующие смеси. В табл. 1 приведены варианты суспензий, содержащих различ- ные концентрации ДМСО и фетальной сыворотки (в процентах от объёма суспензии). Таблица 1 Образцы суспензии для криоконсервирования Содержание сыворотки 10% сыворотки 20% сыворотки Содержание ДМСО 5% 10% 15% 20% 5% 10% 15% 20% После этого проводили эквилибрацию (инкубирование клеточной смеси с криопротектором и сывороткой при комнатной температуре) с целью определения наименее токсичного соотношения веществ для клеток. Эквилибрация проводилась в течение 1 ч (примерный срок предподготовки клеток к замораживанию). Затем проводили подсчёт клеток. Для замораживания выбирали смеси, где сохраня- лось наибольшее количество живых клеток после эквилибрации [7]. Суспензию расфасовывали по криопробиркам, помещали в термо- контейнер и хранили в низкотемпературном морозильнике при тем- пературе минус 150 °С. Оценка жизнеспособности клеток после хранения. Разморажи- вание и посев клеток ФЭК проводили после хранения через 2, 4, 6, 8, 10, 12 месяцев. Криопробирки с клеточной суспензией размора- живали при температуре 26-30 °C. Далее клеточную суспензию раз- бавляли ростовой питательной средой, содержащей 10% фетальной сыворотки, доводили до концентрации 600 тыс. кл/см 3 , вносили в культуральные флаконы площадью 25 см 2 , инкубировали при 37 °С. Монослой ФЭК ежедневно просматривали под микроскопом, отме- чали длительность его формирования и процент покрытия клетками рабочей поверхности культурального флакона. Изучение сохраняемости клеток ФЭК при криоконсервирова- нии в жидком азоте (минус 196 °С) . По истечении 24 ч пробирки Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека