1-248.indd

180 Биотехнология где H – коэффициент выживаемости; С – концентрация выживших клеток в монослое через сутки; D – концентрация клеток в первично-трипсинизированной су- спензии. Если Н<1, способность клеток к размножению и делению при вы- ращивании в монослое очень слабая, и клетки в культуре обладают слабой степенью выживаемости в экстремальных условиях. Если Н≥1, степень выживаемости клеток в монослое достаточно высокая, что способствует образованию полноценного монослоя. Криоконсервирование клеток. Для криоконсервирования исполь- зовали первично трипсинизированную суспензию клеток ФЭК. В качестве криопротектора был использован ДМСО (Karl Roth, Герма- ния). Полученную после центрифугирования клеточную суспензию ресуспендировали в бессывороточной среде Лейбовица-Маккоя, за- тем проводили подсчёт клеток. Далее готовили смесь для криокон- сервирования, состоящую из клеточной суспензии, фетальной сы- воротки и ДМСО в соотношении: 40:50:10% [8]. Полученную смесь расфасовывали по криопробиркам, упаковывали в термоконтейнер и помещали в низкотемпературный морозильник с температурой минус 150 °С (Sanyo, Япония). Данный режим обеспечивал медлен- ное замораживание клеточной суспензии. В ходе проведённых ранее исследований было доказано, что при постепенном замораживании культур клеток они могут храниться долгое время без существен- ных изменений их морфофункциональных свойств [7]. Поcле 7 су- ток хранения проводили размораживание клеток в водяной бане при температуре 40 °С [8], подсчёт клеток и оценку морфологи- ческого состояния живых клеток с помощью светового микроско- па (Nikon, Япония). Затем суспензию разбавляли до концентрации 600 тыс. кл/см 3 , высевали в культуральные флаконы площадью 25 см 2 (Corning, США), инкубировали при температуре 37 °С. Со- стояние монослоя оценивали микроскопически, отмечали длитель- ность и степень формирования монослоя на рабочей поверхности культурального флакона. Выбор оптимального соотношения фетальной сыворотки КРС и ДМСО, добавляемых к клеточной суспензии. Клеточную суспензию ФЭК для замораживания изготавливали согласно общепринятой ме- тодике [2]. Исходя из результатов опубликованных ранее исследо- Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека