1-248.indd

178 Биотехнология В современной биотехнологии для хранения биопрепаратов при- меняется криоконсервирование [4]. Однако оно связано с негатив- ным воздействием на клетки низких температур, вследствие кото- рого обратимо ингибируется адгезивная активность и снижается активность обменных процессов в клетках [5, 6]. Начиная с 80-х гг. 20 века, опубликовано множество работ по изучению оптимальных условий подготовки к охлаждению и вос- становлению клеток из замороженного состояния, а также тести- рованию жизнеспособности культур клеток и их культуральных свойств после оттаивания [4, 5, 6]. Очень важным аспектом данных исследований является правильный подбор криопротектора – веще- ства, уменьшающего негативное воздействие низких температур на клетки [1]. В качестве криопротекторов могут быть использованы: этиленгликоль, глицерин, диметилсульфоксид (ДМСО), сахароза, декстран и др. [3]. Разработка методов криоконсервирования различ- ных культур клеток позволяет сохранить максимальное количество жизнеспособных клеток (первичных – около 58%, перевиваемых – более 90%) [5]. В Китае были проведены исследования по криоконсервирова- нию клеток фибробластов эмбрионов бройлерной породы кур. Было показано, что в результате применения ДМСО в качестве криопро- тектора, медленного замораживания при минус 80 °С со скоростью 1°С/мин и быстрого оттаивания при температуре 42 °С выживае- мость клеток составила 91% [8]. Однако в данной работе нет точных данных по срокам хранения замороженного препарата клеток. Кро- ме того, постепенное замораживание клеток ФЭК, содержащих ви- рус болезни Марека, до температуры жидкого азота (минус 196 °С), с добавлением ДМСО позволяло достичь высокой сохраняемости клеток [3], но с интактными клетками ФЭК подобная работа не про- водилась. Основная задача предлагаемой работы включает в себя разра- ботку метода хранения первично трипсинизированных клеток ФЭК при низких и сверхнизких температурах с целью дальнейшего ис- пользования его в вирусологических исследованиях. Для выпол- нения основной задачи необходимо было проверить пригодность разработанного ранее метода криоконсервирования клеток ФЭК [8] и провести исследования по влиянию факторов замораживания на Э ектронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека