NED373393NED

73 Болезни сельскохозяйственных животных 5 мкл раствора суммарной ДНК и вода до конечного объема 50 мкл. Амплификацию проводили на ДНК-амплификаторе Minicycler PTC-100 (MS Research, США) при следующем температурном режиме: 3 мин пред- варительной денатурации при 94ºС и 35 циклов амплификации (30 с де- натурации при 94ºС, 30 с отжига праймеров при 55ºС, 90 с элонгации при 72ºС) и 5 мин заключительной элонгации. Продукты реакции анализирова- ли с помощью электрофореза в 2% агарозном геле с добавлением броми- стого этидия, при силе тока 50 мА. Результаты и их обсуждение В результате сравнительного анализа последовательностей гена Meq штаммов Rispens (присвоенный номер DQ530348.1), 3004 (EU032468.1) и Md5 (NC_002229) было выявлено, что штаммы имеют высокую степень консервативности. Отличие в последовательности гена Meq между данны- ми штаммами составляет менее 1%. Однако у вакцинных штаммов Rispens и 3004 существуют две формы гена, которые отличаются длиной. Длинная форма имеет размер 1197 пар нуклеотидов, тогда как короткая – 1017 п.н. Данная особенность гена Meq у вакцинных штаммов характерна и для сла- бовирулентных штаммов (JM10 и MKT), тогда как короткая форма харак- терна для высоковирулентных штаммов ВБМ (Md5, CD, MK, RL и др.). При анализе нуклеотидной последовательности встречались штаммы, у которых длина гена Meq отличалась от длины штамма Md5. Но для таких штаммов не был описан патотип. Штамм 3004 ВБМ имеет происхождение от штамма Rispens. Он был реизолирован из эпителия перьевых фолликулов цыплят, вакцинированных против болезни Марека штаммом CVI988 (Rispens) и восстановлен после- довательным пассированием в культуре фибробластов кур. Проведя нукле- отидный анализ гена Meq, мы подтвердили, что в результате этих манипу- ляций изменений в нуклеотидной последовательности не произошло. Таким образом, в результате сравнительного анализа гена Meq штаммов ВБМ с разным патотипом было показано, что вакцинные штаммы 3004 и Rispens имеют отличие в структуре гена от высоковирулентных штаммов ВБМ. Однако, согласно литературным данным, нет строгой корреляции между длиной гена Meq и вирулентностью. Отличие в структуре гена Meq вакцинных штаммов от вирулентных по- зволяет использовать метод ПЦР для дифференциации полевых изолятов от вакцинных штаммов, что является одной из ключевых задач в лаборатор- ной диагностике БМ. Для этого была использована пролин-насыщенная об- ласть гена Meq. Праймеры для реакции были сконструированы таким обра- Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека