NED373393NED

72 Болезни сельскохозяйственных животных но дифференцировать от многих заболеваний птиц. Поэтому ключевую роль при дигностике БМ играют лабораторные исследования. Предложен ряд методов выявления генома ВБМ с помощью метода полимеразной цеп- ной реакции (ПЦР). Однако выявление вируса БМ не всегда информатив- но, поскольку имеет место широкое применение вакцины на основе живого вируса БМ серотипа 1 (штаммы Rispens и 3004). Поэтому встает вопрос о дифференциации вакцинных штаммов от полевых изолятов ВБМ. Геном ВБМ имеет высокую степень консервативности. Это не позволя- ет проводить штаммовую дифференциацию на основе нуклеотидного сек- венирования и сравнительного анализа геномной ДНК. Изучение свойств белков, которые присутствуют только у ВБМ-1: Meq, vIL-8, pp38, показало, что основным онкопротеином является Meq [3]. Удаление Meq-гена у он- когенных штаммов не влияло на репликацию вируса in vitro , но лишало онкогенных свойств in vivo [4]. Сравнение нуклеотидной последовательности гена Meq у изолятов с различной степенью вирулентности показало наличие мутаций в пролин- насыщенной области, которые могут определять онкогенность вируса. Однако строгой корреляции установлено не было. У вакцинного штамма Rispens (CVI988) ген Meq имеет 2 формы: длинную (L) размером 398 а.о. и короткую (S) – 339 а.о. [1]. Наличие вставки повторов 59 а.о. в пролиновой области L-Meq определяет его апатогенность. Целью данной работы было предложить метод дифференциации вак- цинных штаммом ВБМ от полевых вариантов. Для этого было необходи- мо провести сравнительный анализ гена Meq вакцинных штаммов 3004, Rispens и вирулентных; выбрать наиболее информативный фрагмент гена Meq для амплификации; рассчитать структуру праймеров для ПЦР; про- вести испытание метода на вакцинном препарате и вирулентном штамме. Материалы и методы ВБМ . Для исследований использован вакцинный штамм 3004 ВБМ про- изводства ФГБУ «ВНИИЗЖ» и высоковирулентный штамм Md5, получен- ный из коллекции ATCC (США). Выделение ДНК выполняли с помощью коммерческих наборов «Рибо- сорб-50» (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Россия) согласно прилагаемо- му протоколу. Полимеразная цепная реакция (ПЦР). ПЦР проводили в реакционной смеси следующего состава: 5 мкл 10× буфера для Pfu ДНК-полимеразы, 3 мМ Mg 2+ , 0,2 мМ dNTPs, 2 ед.акт. Pfu ДНК-полимеразы, по 10 пмоль праймеров (forvard ccccaacagcccctccaa, revers ccgagggaaactgaatataaatct), Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека