NED373393NED

54 Болезни сельскохозяйственных животных фикации в ОТ-ПЦР) с помощью дидезокси-опосредованного метода обры- ва цепи с использованием набора BigDye® Terminator v1.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystem, США) согласно описанию производителя. Для удаления солей и несвязанных BigDye® терминаторов из реакционных секвенирующих смесей был использован набор BigDye® XTerminator™ Purification Kit (Applied Biosystem, США). Последовательности определяли с помощью автоматического анализатора нуклеиновых кислот ABI Prism 3100 DNA sequencer (Applied Biosystems, США). Каждый фрагмент ДНК секвенировали дважды в обоих направлениях. Генетический анализ нуклеотидных последовательностей. Для прове- дения генетического анализа были использованы нуклеотидные последова- тельности ВНБ, опубликованные в базе данных GenBank (http://www.ncbi . nlm.nih.gov). Сборку и редактирование нуклеотидной последовательности и соответствующей ей аминокислотной последовательности проводили с использованием пакета прикладных программ BioEdit (ClustalW). Результаты и обсуждение Полученная полная нуклеотидная последовательность генома изолята Pi/Rus/Kemerovo/762-2/05 соответствует общей длине генома в 15204 нук- леотида (с учетом не определенных концевых подпраймерных областей, которые полностью повторяют нуклеотидные последовательности прайме- ров). Анализ полученной полной нуклеотидной последовательности позво- лил обнаружить в ее составе шесть открытых рамок считывания (ОРС), ко- торые кодируют полипептиды длиной более 150 аминокислотных остатков. Сопоставление обнаруженных ранее ОРС для других штаммов ВНБ позво- лило установить, что в состав генома изолята Pi/Rus/Kemerovo/762-2/05 входит шесть характерных для вируса НБ генов, кодирующих белки NP, P, M, F, HN, L. В настоящее время описано 15 генотипов (I–XV) и множество подтипов ВНБ [8]. Генотип VI ВНБ был дополнительно разделен на шесть подтипов (VIa–f). Недавно было подтверждено наличие четырех подтипов генотипа VI, соответствующих подтипам VIa, VIb, VIc и VIe [8], в том числе подтипа VIb, вызвавшего продолжающуюся с начала 80-х гг. прошлого века третью панзоотию НБ среди голубей [1, 2, 18]. Ранее было определено, что изолят Pi/Rus/Kemerovo/762-2/05 принад- лежит генотипу VI подтипу VIb. Дальнейший анализ показал, что изолят Pi/Rus/Kemerovo/762-2/05 относятся к «классической голубиной» генети- ческой линии VIb/1 (рис. 1). Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека