NED373393NED

52 Болезни сельскохозяйственных животных адаптация полевых изолятов к организму птиц этих видов, генетически более устойчивых к заболеванию НБ, чем куриные, приводит к снижению его вирулентности для кур при сохранении молекулярных детерминант па- тогенности. Данный феномен несовпадения биологических и молекулярно- генетических свойств изолятов ВНБ слабо изучен и требует пристального внимания. В то же время имеются данные, что при проведении достаточно небольшого числа пассажей на курах может наступить реверсия вирулен- тных свойств [1, 3, 10, 16, 23, 24]. Поэтому парамиксовирус голубей может представлять скрытую угрозу для птицеводческого производства. Сравнительный и филогенетический анализ нуклеотидных последова- тельностей гена F показал, что часть изолятов, выявляемых от голубей в Российской Федерации в течение последнего десятилетия, принадлежит «классической голубиной» генетической линии VIb/1, которая вызвала пан- зоотию НБ у голубей [1, 18]. В этой статье мы сообщаем о характеристике полного генома изолята Pi/Rus/Kemerovo/762-2/05 ВНБ, который является представителем генетической линии VIb/1. Материалы и методы Для определения полной нуклеотидной последовательности генома был выбран изолят Pi/Rus/Kemerovo/762-2/05 ВНБ, выделенный из патологиче- ского материала от голубя. Выбор праймеров для секвенирования полного генома изолята ВНБ Pi/ Rus/Kemerovo/762-2/05. В качестве основы для разработки системы прайме- ров для секвенирования полного генома изолята Pi/Rus/Kemerovo/762-2/05 были взяты полные последовательности геномов штаммов ВНБ из базы данных GenBank (AY562988, AY562989, AJ880277, JF827026, JF827027) и частично полученные ранее последовательности для изолята Pi/Rus/ Kemerovo/762-2/05. Все эти изоляты принадлежат VI генотипу подтипам VIa, VIb (VIb/1, VIb/2) ВНБ. Выравнивание и сравнительный анализ нук- леотидных последовательностей проводили с помощью компьютерной программы BioEdit. Расчет праймеров выполнялся с помощью программы Oligo (v.3.3). Оценку реальной эффективности подобранных пар праймеров проводили экспериментально. Схема секвенирования генома включала более 40 перекрывающихся на 50–70 н. фрагментов длиной 350–400 н., ограниченных смысловым и ан- тисмысловым праймерами. С помощью этой праймерной конфигурации в ОТ-ПЦР получали продукты длиной 600–800 н., которые после очистки сек- венировали с помощью внешних и внутренних праймеров. Средняя длина полученной достоверной последовательности составляла около 600 нукле- Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека