NED373393NED

37 Болезни сельскохозяйственных животных в объёме 100 мкл, инкубировали при температуре 37ºС. 0,1 М карбонатно- бикарбонатный буфер (рН 9,5) использовали для иммобилизации антигена и 0,05 М трис-НСl буфер с 0,2 М NaCl, содержащий 0,1% твин-20 (рН 7,6) – для разведения тестируемых и контрольных проб, антивидового конъю- гата и межэтапной промывки. В качестве субстрата использовали раствор АБТС (Synbiotics, США). Реакцию останавливали добавлением в каждую лунку 100 мкл 1% раствора додецилсульфата натрия (ДСН). Учёт реакции проводили спектрофотометрически при длине волны 405 нм. Процент бло- кирования (Б%) определяли по формуле: Ɉɉ ɢɫɫɥ. ɩɪɨɛɵ – Ɉɉ ɤɨɧɬɪɨɥɹ ɮɨɧɚ Ȼ% = 100 – × 100, Ɉɉ ɤɨɧɬɪɨɥɹ ȻȺ - Ɉɉ ɤɨɧɬɪɨɥɹ ɮɨɧɚ где ОП иссл. пробы – значение оптической плотности смеси исследуемой пробы с блокирующими антителами; ОП контроля БА – среднее значение оптической плотности контроля блоки- рующих антител; ОП контроля фона – среднее значение оптической плотности контроля фона. Положительными считали пробы, имевшие значение процента блокиро- вания больше 30 для FAdV-4 и больше 45 – для FAdV-2. Отрицательными считали пробы с процентом блокирования меньше 20, промежуточные зна- чения считали сомнительными. Непрямой вариант иммуноферментного анализа (ИФА) . Определение ти- тра антител к FAdV-2 проводили в непрямом варианте ИФА с использованием планшетов (Nunc, MaxiSorp, Дания), сенсибилизированных антигеном FAdV-2 в 0,1 М карбонатно-бикарбонатном буфере (рН 9,5). 0,05 М трис-НСl буфер с 0,2 М NaCl, содержащий 0,1% твин-20 (рН 7,6), использовали для разведения тестируемых и контрольных проб, антивидового конъюгата и межэтапной про- мывки. Все компоненты в реакции добавляли в объёме 100 мкл, инкубировали при температуре 37ºС. Исследуемые и контрольные сыворотки применяли в разведении 1:400. Для обнаружения образовавшихся комплексов использовали антикуриный иммунопероксидазный конъюгат фирмы Synbiotics (США) в ра- бочем разведении. В качестве субстрата использовали раствор АБТС. Реакцию останавливали добавлением в каждую лунку 1% раствора ДСН. Учёт реакции проводили спектрофотометрически при длине волны 405 нм с использованием компьютерной программы «СИНКО-ИФА». Положительными считали титры антител выше 450. Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека