NED373393NED

119 Вопросы биотехнологии Синтез кДНК и амплификацию вирусной кДНК проводили с помощью стандартной двустадийной полимеразной цепной реакции (ПЦР) по ранее описанной методике [1]. В работе использованы реактивы фирмы Promega (США) и оригинальные праймеры. Для реверсии и первой амплификации использовали пару праймеров 1AS3 (GAT-GCG-TCG-TCA-CG(T/C)-AGT- CT) и 4AS3 (GAC-TT(T/C)-GAC-CAC-CCA-CGC-CA). Для гнездовой ре- акции «Nested» использовали пару праймеров 2AS3 (CA(A/G)-ATG-CAA- ACG-ACC-ACC-AC) и 3AS3 (GCC-TCC-TT(A/G)-CCA-CTC-CCA-A). Результаты и обсуждение Для проведения эксперимента была сформирована группа (n=30) 10-сут. эмбрионов СПФ-кур, которых заразили в аллантоисную полость вируссо- держащей суспензией с титром 5,0 lg ТЦД 50 /0,1 мл. В течение последую- щих 24–72 ч инкубации гибель эмбрионов не отмечена. Через 96 ч была отмечена гибель 3 эмбрионов, по истечению 5 и 6 сут. (120–144 ч) в опыт- ной группе отмечена гибель 19 и 8 эмбрионов, соответственно. Среди отри- цательного контроля (n=10) гибели эмбрионов СПФ-кур не было в течение всего эксперимента. После гибели эмбрионов экспериментальной группы эмбрионы СПФ-кур контрольной группы были умерщвлены экспозицией при температуре 4ºС в течение 12 ч. В процессе вскрытия погибших инфицированных эмбрионов наблюда- ли выраженную гиперемию кожных покровов и общее отставание в росте (рис. 1), а также обширные кровоизлияния в области затылка (рис. 2). Рис. 1. Эмбриопатическое действие изолята ARV04/02rus на куриные эмбрионы экспериментальной группы (№№ 3–8); № 1, 2 – контрольная группа Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека