NED373393NED

118 Вопросы биотехнологии щих на птицефабриках Российской Федерации. Несмотря на то, что наиболь- шее накопление вируссодержащего материала наблюдают при культивирова- нии вируса на различных клеточных культурах, показана возможность успеш- ной репродукции РК кур в эмбрионах свободных от патогенных факторов кур (СПФ-кур), также отмечена возможность использования развивающихся кури- ных эмбрионов для выделения полевых изолятов реовируса [8]. Размножение РК в эмбрионах СПФ-кур сопровождается поражением различных органов эмбриона и эмбриональных оболочек [6, 7, 8, 9]. Было также показано, что при оценке вирулентности изолятов РК наблюдается корреляция между результа- тами, полученными при заражении суточных цыплят и 10-11-сут. эмбрионов СПФ-кур, что может быть использовано в комплексе лабораторных исследова- ний и изучении этиологической роли агента в развитии болезни [9, 11]. Целью данной работы было изучение особенностей репродукции изолята РК ARV04/02rus в эмбрионах СПФ-кур при заражении в аллантоисную полость. Материалы и методы Вирус. В эксперименте использовали изолят РК ARV04/02rus, вы- деленный из пораженных суставов кур-бройлеров на птицефабрике Владимирской области [1]. В ходе работы использовали экстраэмбриональ- ную жидкость (ЭЭЖ), отобранную из аллантоисной полости инфицирован- ных эмбрионов СПФ-кур. Культура клеток. Использовали первично трипсинизированную культуру клеток куриных фибробластов (КФ) эмбрионов СПФ-кур (Lohmann, Германия). Контроль клеток ЭЭЖ на контаминацию микоплазмами проводили с использо- ванием коммерческого набора «МикКом» (ИнтерЛабСервис, Москва). Экспериментальное заражение. ЭЭЖ с инфекционной активностью 5,0 lg ТЦД 50 /0,1 мл инокулировали экспериментальной группе 10-сут. эм- брионов СПФ-кур (Lohmann, Германия). По окончанию эксперимента контрольные эмбрионы и живые эмбрионы опытных групп охлаждали при температуре +4ºС в течение 12 ч. Определение инфекционной активности. Активность вируссодержащей ЭЭЖ определяли титрованием на культуре клеток КФ методом последо- вательных 10-кратных разведений. Титром вируса считали наивысшее его разведение, вызывающее ЦПД в 50% культуры клеток КФ. Титр вируса вы- ражали в lg ТЦД 50 /мл и рассчитывали по методу Кербера в модификации Ашмарина [2]. Выделение нуклеиновой кислоты. Двухцепочечную РНК РК выделяли коммерческим набором NucleoS+ тм (Биоком, Россия) согласно инструкции производителя. Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека