NED373392NED

Особо опасные болезни животных 71 объёме 0,2 мл, цыплят 2 группы аналогично вакцинировали инактивированным ВНБ с ФБР, цыплята 3 группы (отрицатель- ный контроль) оставались непривитыми. Непрямой вариант иммуноферментного анализа (ИФА). ИФА для определения титра антител в сыворотках крови, слёзной жидкости и трахеальных смывах цыплят проводили по общепри- нятой схеме с небольшими модификациями [1]. Титр антител в испытуемых пробах определяли по конечной точке титрования. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА). РТГА проводили с использованием коммерческого набора для выяв- ления антител к вирусу НБ в РТГА (ФГБУ «ВНИИЗЖ») соглас- но инструкции по применению. Количественный анализ субпопуляций лимфоцитов. Выделение лимфоцитов из периферической крови кур проводили по стандарт- ной методике с использованием Ficoll-Paque tm PLUS (Amersham Biosciences, Швеция). Подготовку проб для выявления поверхност- ных маркеров лимфоцитов осуществляли с использованием мече- ных моноклональных антител CD3-FITC, CD4-PE, CD8α-FITC и MHC II-PE (Southern Biotech, США). 50 мкл суспензии лимфоцитов инкубировали с 2 мкл меченых антител в течение 30 мин при тем- пературе +4°С. Фракцию лимфоцитов отмывали однократно ФБР центрифугированием в течение 10 мин при 300 g. Осадок ресуспен- дировали в 1 мл BD FACS Flow буфера (BD Biosciences). Количе- ственный анализ клеток проводили на проточном цитофлуориметре BD FACS Calibur (Becton, Dickinson, США). Измерение и обработку полученных результатов осуществляли с использованием про- граммного обеспечения Cell Quest Pro 1.0. Статистический анализ результатов. Для статистической обработки данных использовали программу Statistica 6.0. Суще- ственность различий результатов серологических исследований проб от цыплят вакцинированных и контрольной групп опреде- ляли с использованием непараметрического критерия Манна- Уитни. Различия считали статистически значимыми при р<0,05. Результаты и обсуждение В ходе исследований изучали иммуногенные свойства инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни, со- держащей EMULSIGEN®-D, при применении на слизистые оболочки. Эффективность вакцины определяли на 21-сут. цып- Элек ронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека