NED373392NED

Болезни сельскохозяйственных животных 115 нейтрализация инфекционного действия 100 ТЦД 50 вируса в 50 % зараженной культуры клеток IB-RS-2. Положительным считали значение титра, соответствующее 5,5 log 2 . 5В7-ИФА. Реакцию конкурентного «сэндвич»-варианта ИФА с использованием коммерческих препаратов монокло- нальных антител 5В7 к вирусу ВБС (Институт зоопрофилакти- ки, Брешиа, Италия) проводили согласно рекомендациям произ- водителя и МЭБ [8] c некоторыми модификациями. Улавлива- ющие антитела наносили в рабочем разведении 1:400, конъюгат детекторных антител с пероксидазой хрена – 1:200. Культу- ральную вирусную суспензию наносили в разведении 1:10. Пробы сыворотки крови свиней исследовали в 5В7-ИФА в раз- ведении 1:10. Окрашивание лунок планшета проводили суб- стратной смесью ТМВ в течение 20 минут при комнатной тем- пературе, останавливали реакцию добавлением 10 % серной кислоты. Реакцию учитывали с помощью многоканального спектрофотометра путем измерения оптической плотности (ОП) при длине волны 450 нм. Значения ОП контрольных и исследу- емых проб переводили в значение процента ингибиции (PI) по формуле: %100 ) ОП - ОП ОП - ОП 1( PI фона контроля КА контроля фона контроля КА с пробы иссл.    , где ОП иссл. пробы с КА – среднее значение оптической плотности смеси исследуемой пробы с конкурентными антителами; ОП контроля КА – среднее значение оптической плотности кон- троля конкурентных антител; ОП контроля фона – среднее значение оптической плотности контроля фона. Пробы, имеющие значение PI≥70 %, считали положитель- ными. При использовании 5В7-ИФА для тестирования антиге- нов реакцию проводили по аналогичной схеме за исключением сывороточной стадии. Определение родства между разными штаммами вируса ВБС. Сыворотку крови, полученную от свиней, заражённых ви- русом О-72, исследовали в РМН и 5В7-ИФА с разными штам- мами вируса ВБС методом двукратных последовательных раз- Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека