NED373390NED

Ящур и другие болезни крупного рогатого скота и свиней 95 Диагностическую чувствительность и специфичность вычисляли по формулам, рекомендованным МЭБ: Д чув = (ИП / ИП + ЛО) х 100%; Д спец = (ИО / ИО + ЛП) х 100%, где ИП – истинноположительный результат; ЛО – ложноотрицательный результат; ИО – истинноотрицательный результат; ЛП – ложноположительный результат. Результаты и обсуждение Ген, кодирующий токсин ApxIV A. pleuropneumoniae , амплифициро- вали методом ПЦР. В реакции использовали праймеры, содержащие сай- ты рестрикции Bam HI и Hind III. После обработки соответствующими рестриктазами ампликон клонировали в экспрессирующий плазмидный вектор. В результате трансформации рекомбинантной плазмидой компе- тентных клеток E. coli получили клоны, экспрессирующие рекомбинант- ный токсин A. pleuropneumoniae , содержащий на N-конце шесть остатков гистидина. Очистку рекомбинантного белка проводили методом металл- хелатной хроматографии. Со 100 мл культуры E. coli было получено 6,8 мг очищенного препарата рекомбинантного белка (4 мл раствора белка с концентрацией 1,7 мг/мл). Антигенную активность белка проверяли в непрямом вариан- те ИФА с контрольными сыворотками свиней, взятыми в разведении 1:20. Рекомбинантный белок разводили от 1:100 (17 мкг/мл) до 1:6400 (0,260 мкг/мл). Зависимость средней оптической плотности контроль- ных сывороток от концентрации рекомбинантного антигена представ- лена на рисунке. Максимальное разведение белка, при котором еще проявлялась его антигенная активность, составляла 1:6400 (0,260 мкг/мл). Концентрацию белка, равную 1,06 мкг/мл, выбрали рабочей в ИФА. Для определения рабочего разведения сывороток крови методом последовательного титрования в ИФА исследовали 110 сывороток кро- ви свиней с разным уровнем антител. Для каждой сыворотки вычис- лили титр и процент позитивности. С помощью компьютерной про- граммы определили коэффициент корреляции, стандартную ошибку, построили отдельные линии регрессии для разведений 1:20, 1:40, 1:80, соответственно. Результаты регрессионного анализа по всем данным представлены в табл. 1. Эл ктронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека