NED373390NED

Ящур и другие болезни крупного рогатого скота и свиней 83 В то же время в ряде стран ЕС широкое распространение нашли методы выявления антител с помощью как традиционных серологических реак- ций, так и иммуноферментного анализа. В Канаде и Дании серологиче- ские методы используют для эпидемиологического надзора за поголовьем свиней (9, 12). В настоящее время различают 15 серотипов A. pleuropneumoniae , в связи с этим ряд исследователей применяет в качестве антигена для ИФА «mix» антиген, состоящий из наиболее «актуальных» серотипов A. pleuropneumoniae (10, 11). На территории РФ (2, 6) чаще других выделяют серотипы 1, 2 и 6 (3, 4), поэтому целью нашей работы было изучение возможности исполь- зования «mix» антигена (серотипов 1, 2 и 6) для выявления антител к бак- териям A. pleuropneumoniae . Материалы и методы Бактерии A. pleuropneumoniae . В работе использовали изоляты Actinobacillus pleuropneumoniae, выделенные на территории РФ, в ла- бораториях микробиологии и диагностики бактериальных инфекций ФГУ «ВНИИЗЖ»: Г-1 (серотип 1), Ш-1 (серотип 2), К-2 (серотип 6). Сыворотки . Использовали полевые сыворотки свиней, доставленные из свиноводческих хозяйств различных регионов России и сыворотки им- мунизированных животных. Конъюгат антисвиных антител, меченных пероксидазой . Приме- няли коммерческий препарат антисвиных антител, меченных перокси- дазой хрена, полученный из ВНИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи, г. Москва. Растворы. Антиген разводили в карбонатно-бикарбонатном буфере (КББ), рН 9,6. Для блокирования свободных мест применяли 1% раствор сухого обезжиренного молока фирмы Applechem, разведенного в буфере ТБС с рН 7,4, содержащем 0,02М Tris-HCl, 0,15M NaCl, 0,05% Tween-20. Сыворотки и конъюгат разводили в буфере ТБС. Несвязавшиеся компонен- ты реакции удаляли путем отмывания в буфере ТБС. Субстратом служил раствор АБТС (2,2-азиноди-(3-этилбензотиазолин-сульфонат) фирмы ICN, останавливали реакцию 1% раствором ДСН (додецил-сульфанат натрия). Получение липополисахаридного антигена. Липополисахаридный антиген A. pleuropneumoniae получали по методике S. Radacovicii (13). Непрямой вариант ИФА выполняли по стандартной методике (5). Учитывали реакцию спектрофотометрически при длине волны 405 нм. По измеренным оптическим плотностям образца положительной (К + ) и от- Электронная Научн я СельскоХозяйственная Библиотека