NED373390NED

48 Ящур и другие болезни крупного рогатого скота и свиней Поскольку моноклональные антитела по природе моновалентны, то для диагностики необходимо использовать комбинацию антител, по крайней мере из трех вариантов к разным, преимущественно консервативным, антигенным детерминантам, на тот случай, если некоторые из них будут повреждены. Для составления подобных комбинаций по результатам проведенной НРИФ было отобрано четыре варианта наиболее активных антител (№ 1, 16, 18, 20) с ин- тенсивностью специфичной флуоресценции (ярко-зеленой или желтовато- зеленой) в положительных препаратах на 4 или 3 креста в разведении 1:256 и отсутствием флуоресценции в отрицательных препаратах. Перед комбинированием все антитела привели к одной концентрации – 0,6 мг/мл. В НРИФ исследовали комбинацию из 4-х (№ 1) антител и все возможные комбинации из 3-х антител. Антитела смешивали в соотно- шении 1:1 (v/v). Приготовленные смеси исследовали в разведениях 1:32, 1:64, 1:128, 1:256, 1:512. Учет реакции проводили по системе 4-х крестов. Результаты исследований представлены в таблице. Как видно из таблицы, по активности и специфичности наилучшие по- казатели были у препаратов разных вариантов смеси из 3-х клонов монокло- нальных антител. Проведенные исследования показали, что данные комбина- ции антител с практически равной высокой активностью и специфичностью выявляли цитоплазматические включения бешенства. Антитела отобранных клонов в дальнейшем будут наработаны в необходимом количестве, помече- ны флуоресцентной меткой, и их комбинации будут испытаны в прямой реак- ции иммунофлуоресценции на полевых изолятах вируса бешенства. Таблица Результаты исследования специфической активности смесей очищенных моноклональных антител в непрямой реакции иммунофлуоресценции Разведение антител Наличие и интенсивность флуоресценции разных комбинаций моноклональных антител № 1* № 2* № 3* № 4* № 5* К + К – К+ К– К+ К – К+ К– К+ К– 1:32 3+ 3+ 4+ – 4+ – 4+ – 4+ – 1:64 3+ 3+ 4+ – 4+ – 4+ – 4+ – 1:128 2+ – 4+ – 4+ – 4+ – 4+ – 1:256 2+ – 4+ – 4+ – 4+ – 4+ – 1:512 1+ – 3+ – 3+ – 3+ – 3+ – * – комбинации антител: № 1 – 1, 16, 18, 20; № 2 – 1, 16, 18; № 3 – 1, 16, 20; № 4 – 1, 18, 20; № 5 – 16, 18, 20; «К+» – положительный препарат; «К-» – отрицательный препарат Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека