NED373390NED

Ящур и другие болезни крупного рогатого скота и свиней 47 активностью 1:62500 – 1:1562500 и выше. Используя в качестве антигенов очищенный рибонуклеопротеин, гликопротеин вируса бешенства (ВБ) и белки культуры клеток почки сирийского хомячка ВНК-21, в ИФА было установлено, что 22 препарата (9 препаратов очищенных антител и 13 ас- цитов) моноклональных антител оказались специфичны только к РНП ВБ, а 4 перекрестно реагировали со всеми антигенами. Как известно, при диагностике бешенства в РИФ в препаратах тка- ни мозга выявляются специфические для инфекции тельца Бабеши-Негри – скопления в цитоплазме пораженных клеток нуклеопротеина вируса бешенства. Поэтому диагностическое значение имеют моноклональные антитела, специфичные к N-белку, основному компоненту рибонуклео- протеинового комплекса. Отобранные по результатам ИФА 22 варианта моноклональных анти- тел, специфичных к РНП ВБ, исследовали в непрямой реакции иммуно- флуоресценции (НРИФ) с использованием препаратов лиофилизирован- ной ткани головного мозга кроликов, инфицированных вирусом бешенства эталонного лабораторного штамма CVS (положительный препарат) и не- инфицированных кроликов (отрицательный препарат). Целью исследова- ния было изучить способность антител выявлять внутриклеточные вклю- чения вируса бешенства и отобрать наиболее активные и специфичные. Для оценки специфической активности антител в НРИФ их исследовали в разведениях 1:32, 1:128, 1:256 и 1:512. При этом концентрацию очищен- ных антител предварительно приводили к одному значению – 0,6 мг/мл (по препарату антител с наименьшим содержанием белка). По 4-кресто- вой системе оценивали в положительных препаратах количество и мор- фологию включений, интенсивность флуоресценции, а в отрицательных препаратах – наличие неспецифического свечения. Как показали резуль- таты исследования, в положительных препаратах со значительной частью образцов моноклональных антител из асцитов в разведении 1:32 выявля- ли множественные включения разнообразной формы (звезды, запятые, неопределенной формы) и величины с ярко-зеленой флуоресценцией на 4 креста, затрудняющей обнаружение включений ВБ характерной округло- овальной формы. Аналогичную картину наблюдали для этих антител в разведении 1:32 и с отрицательными препаратами. В том же разведении с образцами очищенных антител в положительных препаратах наблюда- ли включения типичной для бешенства формы и с такой же интенсивной флуоресценцией, при отсутствии специфичного свечения в отрицатель- ных препаратах. Поэтому для дальнейших исследований использовали препараты очищенных моноклональных антител. Электро ная Научная СельскоХозяйственная Библиотека