NED373390NED

46 Ящур и другие болезни крупного рогатого скота и свиней В данной статье изложены результаты работы по оценке монокло- нальных антител для диагностики бешенства животных. Материалы и методы Моноклональные антитела были получены сотрудниками группы им- мунохимии филиала Института биоорганической химии им. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН (г. Пущино, Московская обл.). Для получения и изучения характеристик моноклональных антител использовали антигены, полученные в ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»: – BALB/c мышей иммунизировали очищенным и концентрирован- ным культуральным вирусом бешенства вакцинного штамма «ВНИИЗЖ» по ранее описанной методике (4); – рибонуклеопротеин вируса бешенства (РНП ВБ) получали пу- тем разрушения инфицированных вирусом штамма «ВНИИЗЖ» клеток ВНК-21, с последующим ультрацентрифугированием осветленного кле- точного гомогената в градиенте плотности хлористого цезия (2). Гликопротеин ВБ (G-белок) получали путем обработки очищенного вируса бешенства штамма «ВНИИЗЖ» тритоном Х 100 в конечной кон- центрации 2% в течение 20 мин при комнатной температуре. Затем раз- рушенный препарат вируса подвергали ультрацентрифугированию в гра- диенте плотности хлористого цезия 1,16 – 1,36 г/см 3 в течение 2 часов при 70 000 g. С градиента отбирали верхний слой с содержащимся в нем G-белком в объеме наносимой пробы и диализовали против фосфатно- солевого буфера. Полученный препарат обрабатывали очищенными по- ликлональными антителами против РНП ВБ для связывания оставшегося РНП. Образованный комплекс антитело-РНП удаляли с помощью белокА- сефарозы. Рабочее разведение очищенного G-белка устанавливали мето- дом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). Концентрацию белка в очищенных препаратах определяли по Lowry O.H. (6). В непрямой реакции иммунофлуоресценции использовали флуо- ресцирующие антитела против иммуноглобулинов мыши производ- ства НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи в рабочем разведении, рекомендованном производителем. Результаты и обсуждение Сотрудниками ФИБХ было получено 26 препаратов моноклональных антител, реагирующих в ИФА с вирусом бешенства штамма «ВНИИЗЖ» с Электронная Научная Сельс оХозяйственная Библиотека