NED373390NED

252 Вопросы биотехнологии В работе использовали среды Игла, ПСП, ПСС, 0,4% ГЛА и ДМЭМ (F-12). Первично трипсинизированные клетки 12-суточных эмбрионов гуся (КЭГ) были получены на 1-м пассаже из лаборатории парамиксовирусных инфекций. Первичная клеточная культура была необходима для выделе- ния вируса энтерита гусей. Клетки были переданы в лабораторию культур клеток, где про- водилось субкультивирование КЭГ до 30 пассажа. Субкультура была адаптирована к среде Игла (по прописи «ВНИИЗЖ» с 0,25% ГЛА). Ис- пользовались сертифицированные, без латентного присутствия мико- плазм и вирусов, фетальные сыворотки КРС фирм Bioclot и HeyClone. Кратность рассева не превышала 1:2. Результаты и обсуждение При субкультивировании клеток эмбриона гуся были выявлены сле- дующие закономерности. После трипсинизации (снятия клеток с субстрата) монослой диспергировался до отдельных клеток и клеточных агрегатов. От- дельно адгезированные клетки не сразу приступали к делению. Основной рост монослоя происходил в клеточных агрегатах, которые образовывали тканеподобную структуру. От этих агрегационных центров шло разраста- ние колонии. Монослой формировался в псевдосинцитий, а затем в 2- или 3-слойную структуру. Клетки секретировали внеклеточный матрикс, который агрегировал клетки и препятствовал полноценному диспергированию клеток при трипсинизации. Характерную морфологию имели интерфазные клетки. Фибробластоподобные и веретенообразные клетки формировали монослой, характерный для первичных клеток, полученных из птичьих эмбрионов. С последующими пассажами морфология клеток не менялась, но к 10-му пассажу появились гигантские клетки размером до 40 мкм. Деление клеток происходило по обычному типу: в профазе идёт округление клетки, её поверхность лишается крупных цитоплазматических выростов, после чего она делится на две дочерние клетки. После деления дочерние клетки долгое время (до 8 часов) имеют аморфную структуру, они выбрасывают во все стороны крупные цитоплазматичекие выросты. Адгезия их проис- ходит в местах, где есть колонии, включающие более 2-х клеток. Здесь они принимают морфологию адгезированных клеток стационарной фазы роста (веретенообразную, фибробластоподобную). В процессе пассирования (к 20-му пересеву) была отмечена вакуолиза- ция клеток на всех стадиях клеточного цикла. Этот процесс периодически сопровождался спонтанной дегенерацией монослоя. Для выяснения дина- Электронная Научная С льскоХозяйственная Библиотека