NED373390NED

Вопросы биотехнологии 243 Поэтому были проведены исследования по культивированию из одной оптимальной посевной дозы целой серии монослойных культур в матра- сах РУ путем многократных последовательных переливов взвеси непри- крепившихся клеток и доращивания их в кондиционированной среде. Предложено 4 варианта, дающих гарантию успешного выращивания клеток в пристеночных культурах. 1 вариант. Через 48 ч культивирования первично трипсинизирован- ных клеток ПТ ростовую среду с взвешенными в ней клетками перели- вали в новый матрас. На 5 сутки в обоих матрасах формировался почти одинаковый монослой. Таким образом, из одной посевной дозы получали две равноценные монослойные культуры. 2 вариант. Через 24 ч после посева клеток ПТ ростовую среду с не- прикрепившимися клетками переносили в новый матрас, из которого через 48 ч также переливали неприкрепившиеся клетки в следующий новый матрас. То есть из одной посевной дозы получали 3 монослой- ные культуры. 3 вариант. Из одной посевной концентрации клеток путем последова- тельных переносов через 8, 16, 24 ч после посева получали 4 монослой- ные культуры клеток ПТ. 4 вариант. Из одной посевной дозы через 3, 8, 12, 24 ч после посева клеток путем последовательных переносов неприкрепившихся клеток по- лучали 5 монослойных культур клеток ПТ. Во всех вариантах были получены полноценные монослои первич- ной культуры клеток ПТ. Отличие заключалось в том, что происходила задержка формирования монослоя пропорционально кратности после- довательных переносов. В 1 и 2 вариантах монослои формировались на 5 сутки, в 3 и 4 вариантах – на 6-7 сутки. Таким образом, благодаря серийному выращиванию первичной куль- туры клеток ПТ из одной посевной дозы можно получить несколько моно- слойных культур, повышающих суммарное количество клеток. Выводы 1. Скорость адгезии первично трипсинизированных клеток ПТ не за- висит от их посевной концентрации и только 4-5% клеток через 1 ч после посева прикрепляются к субстрату. 2. Неприкрепившиеся клетки обогащают среду метаболитами, инду- цирующими клеточную пролиферацию. 3. Применение серийного выращивания первичной культуры клеток ПТ увеличивает общее количество клеток в 5 раз. Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека