NED373390NED

242 Вопросы биотехнологии Из приведенных данных об адгезии клеток можно сделать заключе- ние о существовании предела первоначальной адгезии первично трипси- низированных клеток в пристеночной культуре, достижение которого пре- пятствует дальнейшему их прикреплению к стеклу. Также установлено, что со снижением посевных концентраций кле- ток индекс пролиферации снижается, монослой клеток формируется не везде. Так, на третьи сутки культивирования в матрасах, засеянных в кон- центрациях 300; 400 тыс. кл/см 3 , количество клеток увеличилось в 3,8 и 2,8 раза, соответственно, с образованием 100% монослоя. В матрасах с концентрацией 200 тыс. кл/см 3 их количество возросло в 1,5 раза, моно- слой сформировался на 60%, а при концентрации 100 тыс. кл/см 3 коли- чество клеток практически не изменилось. По-видимому, при посевных концентрациях 300; 400 тыс. кл/см 3 неприкрепившиеся клетки обогащают среду метаболитами, индуцирующими клеточную пролиферацию. Посевная доза 300 тыс. кл/см 3 является оптимальной из-за удачного соотношения адгезированных и неадгезированных клеток и создает эф- фективную кондиционированную среду. Однослойная первичная культура клеток ПТ малопроизводительна, что связано с невысокими сборами жизнеспособных клеток при дезагрегации ткани, а главное – с низким (до 4-5%) прикреплением клеток к субстрату. Поэтому вторым этапом наших исследований явилось определение рационального использования неприкрепившихся клеток для повышения результативности выращивания первичной культуры клеток ПТ. Материалом для исследований служили 2-суточные неприкрепивши- еся клетки, полученные при посеве первично трипсинизированных кле- ток в оптимальной концентрации 300 тыс/см 3 . Переживающие в течение 5 суток взвешенные в среде клетки высевали в матрасы РУ и учитывали время образования монослоя. Было обнаружено, что, несмотря на отми- рание клеток в течение 5 суток, количество жизнеспособных взвешенных клеток оставалось равным числу адгезированных и выросших в суточных культурах клеток, а при посевах в новую посуду они не только прикрепля- лись к стеклу, но и начинали пролиферировать. Проводили опыты по последовательному многократному переливу неадгезированных клеток (от 2-3 до 10 раз) из матраса в матрас с одинако- выми и возрастающими промежутками времени (от 1 до 48 ч). Отмечено, что уровень начальной адгезии клеток во всех случаях был примерно равным и сопоставимым с таковым показателем у контрольных культур. Однако дальнейшее культивирование в свежих ростовых средах не завершалось формированием монослоя, в то время как употребление кондиционированных сред обеспечивало активный рост клеток. Электронна Научная СельскоХозяйственная Библиотека

RkJQdWJsaXNoZXIy