NED373390NED

240 Вопросы биотехнологии чечной ткани животных (1, 2, 4, 7). Первичной называется культура, полученная из ткани и выращенная in vitro до первого пересева (1, 3, 6). Выбор почечной ткани обусловлен легкой дезагрегацией ткани детергентами, относительной неприхотливостью клеток к условиям культивирования, широким спектром чувствительности к вирусам животных и человека (1, 3, 4). Первичная культура клеток из почки телёнка относительно гетерогенна. Монослой культуры клеток почки телёнка (ПТ) формируется из эпителиоподобных и веретенообразных клеток, имеет характерный морфологический рисунок, при заражении вирусами проявляет специфические цитопатические изменения клеток (1, 3, 5). В первичной пристеночной культуре ПТ большая часть посеянных жизнеспособных клеток не прикрепляется к субстрату и не участвует в формировании монослоя, а остается во взвешенном состоянии и удаляет- ся во время смены питательной среды (4, 8). Целью исследований явилось изучение жизнеспособности неад- гезированных клеток и возможности выращивания из них серий моно- слойных культур, времени и уровня адгезии клеток, а также роста при- крепившихся клеток. Материалы и методы Первично трипсинизированные клетки ПТ получали по общепри- нятой методике (2, 3). Количество жизнеспособных клеток подсчиты- вали в камере Горяева, используя 0,2% раствор трипанового синего для окрашивания клеток. Первичную культуру клеток ПТ культивировали в матрасах РУ в ро- стовой среде, состоящей из 0,5% ГЛА на солевом растворе Хенкса с 10% сыворотки крови КРС (рН 7,1-7,2), а также в кондиционированной среде с гомологичных клеток. Кондиционированная среда – жидкость, получен- ная в результате инкубации питательной среды с растущими клетками (2). Для снятия со стекла и диспергирования клеток использовали 0,25% рас- твор трипсина. Прикрепленные клетки и монослой культуры ополаскива- ли солевым раствором Хенкса. Через 1, 3, 24 ч подсчитывали количество адгезированных и находящихся в суспензии клеток, а также учитывали качество монослоя и индекс пролиферации. Методом многократных последовательных переносов взвеси непри- крепившихся клеток определяли их способность к адгезии и выращива- нию в пристеночных культурах в обычных лабораторных условиях. Электронная Научная Се ьскоХозяйственная Библиотека