NED373390NED

236 Актуальные вопросы болезней птиц и других видов животных Клеточный дебрис удаляли центрифугированием в течение 25 мин при 2500 об/мин (ротор J–698). Затем супернатант с добавлением ПЭГ-6000 центрифугировали в течение 60 мин при 5000 об/мин (ротор JA–10). Оса- док ресуспендировали в 1:300-1:350 от исходного объема 0,15М ФБР рН 7,4. После этого препарат вируса подвергали ультрацентрифугированию в гра- диенте плотности хлористого цезия (CsCl): 1,25; 1,16 и 1,07 г/см 3 , соответ- ственно в концентрациях 30, 20 и 10% в течение 2,5 ч при 25000 об/мин (ротор АН–650). Опалесцирующую вируссодержащую зону в слое CsCl с концентрацией 20% отбирали и осаждали в течение 1,5 ч при 25000 об/мин (ротор АН–650). Очищенный вирус ресуспендировали в ФБР. Полученный препарат вируса ИНГТ, концентрированный в 1600–2000 раз по объему, по- сле очистки хранили при минус 20°С до использования. Плотность опалесцирующей зоны (препарата) в градиенте CsCl опре- деляли на рефрактометре. Концентрацию белка в полученных препаратах определяли по методу Лоури (6). Результаты и обсуждение В ходе исследований была проведена очистка и концентрирование четырех объемов культуральной вирусной суспензии ИНГТ. Полученные результаты представлены в табл. 1. Таблица 1 Результаты очистки и концентрирования вируса ИНГТ № пре- парата Объем вирусной суспензии, см 3 Исходная инфекционная активность вируса, lg ТЦД 50 /см 3 Инфекционная активность виру- са после концен- трирования, lg ТЦД 50 /см 3 Содержание белка по Лоури, мг/см 3 Объем концентри- рованного вируса, см 3 № элюата 1 2 1 2 1 2 1 2100 9,6 11,85 7,85 4,25 0,55 1 1 2 1650 7,85 10,1 – 1,2 – 1 – 3 1700 6,35 9,35 6,85 0,85 0 1 0 4 1960 7,35 10,1 7,1 1,5 0,3 1 1 Из табл. 1 видно, что чем выше титр исходной вирусной суспензии, тем больше содержание вирусного белка в очищенном концентрирован- ном препарате. При очистке препарата в градиенте в слое с концентрацией 20% CsCl наблюдали опалесцирующую зону, плотность которой составила 1,16 г/см 3 . В слое с концентрацией 10% CsCl была отобрана зона, плотность кото- рой составила 1,07 г/см 3 . Согласно данным литературы, плотность вируса Электронная Научная СельскоХозяйственная Би лиотека