NED373390NED

Актуальные вопросы болезней птиц и других видов животных 235 ского процесса, некротическими изменениями гемопоэтической ткани, кро- воизлияниями в органы и ткани, приводящими к массовой гибели рыб (4, 7). Возбудителем является РНК-содержащий вирус, относящийся к семей- ству Rhabdoviridae , роду Novirhabdovirus , виду Infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV). Он широко распространен на западе Северной Америки (8, 10). Транспортировка контаминированной вирусом икры и инфицирован- ной рыбы привела к распространению вируса в Европе и Юго-Восточной Азии (Корея, Тайвань, Япония, Китай). В настоящее время распространение вируса ИНГТ представляет угрозу для водоемов России. Впервые это заболевание обнаружено в 2000 г. у моло- ди форелевого хозяйства в Московской области (9). В естественных условиях вирус ИНГТ впервые выделили на Камчатке от половозрелой нерки (1). При вспышке заболевания в рыбхозах смертность рыб нередко достига- ет 100%, что приводит к большим экономическим потерям (11). Это наиболее опасное и экономически значимое вирусное заболевание лососевых рыб. Своевременное выявление ИНГТ позволяет проводить адекватные мероприятия, обеспечивающие защиту рыб. При проведении диагно- стических исследований важную роль играют иммунологические ме- тоды (реакция нейтрализации, реакция иммунофлуоресценции, имму- ноферментный анализ), основанные на использовании специфических высокоактивных сывороток. Для получения последних необходима ги- периммунизация животных концентрированными и очищенными ви- русными препаратами. Цель нашего исследования – подбор оптимальных методов и условий очистки и концентрирования вируса ИНГТ и оценка степени его очистки. Материалы и методы Концентрирование и очистку вируса ИНГТ осуществляли в три стадии. 1. Осветление клеточного лизата. 2. Концентрирование вирусной суспензии. 3. Очистка концентрированной суспензии. В работе использовали штамм «Аркус 32/87» культурального виру- са ИНГТ лососевых рыб, культивированный на перевиваемой культуре клеток ЕРС (эпидермальные новообразования больного оспой карпа), с титром инфекционной активности от 6,35 до 9,6 lg ТЦД 50 /см 3 . Для очистки и концентрирования вируса ИНГТ использовали следу- ющие методы: осаждение вируса полиэтиленгликолем (ПЭГ-6000) с по- следующей очисткой в градиенте хлористого цезия (CsCl) и осаждением вируса ультрацентрифугированием. Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека