NED373390NED

Актуальные вопросы болезней птиц и других видов животных 227 тром от 5-10 до 40-50 нм в концентрациях от 10 7 до 10 10 наносфер/мл, которые ранее нами были идентифицированы как нанобактерии (4, 5). По морфологи- ческим и концентрационным характеристикам нанобактерии, выявленные в образцах крови, идентичны структурам, представленным на рис. 1. Из подсчета количества лейкоцитов и сопоставления с дан- ными электронно-микроскопического контроля следует, что у первых 4 кроликов среднее значение лейкоцитов было равно (7,41±1,62) × 10 3 клеток/мл, а в крови кроликов с повышенной контаминаци- ей наночастицами – (13,7±1,7) × 10 3 клеток/мл. Отсутствие чистых животных не оставило нам выбора и поэтому использовали имеющихся в наличии. После проведения «нулевого» контроля кроликов разделили на пять групп по две головы, которые затем были использованы для проверки раз- множения нанобактерий из различных источников. Заражение кроликов проводили подготовленными суспензиями нанобактерий путем инокуля- ции в краевую вену уха. Первые две пары «условно чистых» кроликов инокулировали су- спензиями, полученными из образцов крови от двух коров с лейкозопо- ложительным диагнозом по РИД (КРС-1 и КРС-2). В крови от данных животных под электронным микроскопом установлено присутствие ните- видных форм и сферических наночастиц в концентрациях 10 8 клеток/мл. Объём инокулята – 1 мл каждому кролику. Для третьей пары кроликов в качестве инокулята использовали сте- рильный буферный раствор STE рН 7,4 – 1 мл на каждую голову. Четвертую пару кроликов инокулировали вакцинным вариантом ви- руса классической чумы свиней (ВКЧС). Исходный материал представлял собой замороженную 10% суспензию, приготовленную из селезенки и лимфоузлов кроликов, зараженных ВКЧС. Этот препарат готовили так же как и образцы крови, то есть после оттаивания суспензию по 1 мл центри- фугировали при 500 g, затем надосадочную жидкость повторно центри- фугировали при 2000 g. Полученные осадки ресуспендировали каждый в 1 мл буферного раствора. Электронно-микроскопический контроль по- казал, что конечные препараты содержали наночастицы диаметром от 20 до 200 нм, распределенные как относительно равномерно на поверхности пленки-подложки, так и в виде колоний. Часть наносфер образовывала кластерные структуры в виде цепочек, соединенных перемычками из их цитоплазматического вещества. Концентрация наносфер в препаратах для инокуляции составляла порядка 10 8 -10 9 наносфер/мл (рис. 4). Последний препарат для инокуляции был взят после размноже- ния нанобактерий на искусственной питательной среде Игла МЕМ. Для высева на среду была использована кровь кролика в разведении 1:250. Электронная Научная СельскоХозяйственная Библ о ека