NED373390NED

Актуальные вопросы болезней птиц и других видов животных 211 – монослойную культуру клеток фибробластов УЭ (ККУФ) ГУП ППЗ «Благоварский»; – монослойную культуру клеток фибробластов СПФ-КЭ (КККФ) фир- мы «Lohmann Tierzucht». Перевиваемые линии клеток: – свиную почку эмбриональную версенизированную (СПЭВ); – почку сибирского горного козерога (ПСГК). Эмбрионы в возрасте 9-12 суток заражали в аллантоисную полость по общепринятой методике в дозе 100-1000 ЭЛД 50 /0,2 см 3 . Гибель в течение первых 12 ч считали неспецифической. Эмбрионы, погибшие после этого срока, помещали в холодильник при температуре от 2 до 8 о С и вскрывали не позднее, чем через 8 ч. Монослойные культуры клеток фибробластов утиных и куриных эм- брионов готовили по общепринятым методикам. Для выращивания ис- пользовали суспензию с концентрацией клеток 1,0-1,5 млн/см 3 на среде ПСП с 10% сыворотки КРС. Рассев производили в 3-литровые роллерные сосуды в объеме 300 мл, которые инкубировали при температуре 37 о С в установках с частотой вращения 18-20 об/ч до формирования сплошного клеточного монослоя (48-72 ч). Заражение культур клеток проводили после предварительной отмыв- ки средой Хенкса в дозе 10 ЭЛД 50 /кл с контактом 1 ч при температуре 37 о С, с последующим доливом среды Хенкса и инкубацией при 37 о С. Заражен- ные культуры снимали через 72 ч и промораживали при минус 20 о С. Активность полученного вируссодержащего материала (20% суспен- зии эмбрионов на ФБР и клеточных суспензий) определяли титрованием на 11-12-суточных УЭ. Титр рассчитывали по методу Кербера в модифи- кации Ашмарина. Результаты и обсуждение Для адаптации и репродукции вируса ВГУ были испытаны: утиные эмбрионы, инкубационное яйцо уток, эмбрионы СПФ-кур, первично трипсинизированные культуры клеток этих эмбрионов, а также некоторые перевиваемые линии клеток. Следует отметить 2-3-суточное отставание в развитии УЭ фир- мы «Charles River» по сравнению с УЭ ГУП ППЗ «Благоварский». Раз- ница в весе 16-17-суточных УЭ составляла от 1,0 до 1,5 г. «Подращи- вание» венгерских эмбрионов перед заражением передержанием до 15-16 суток приводило к снижению активности вируса в материале на 0,5-0,8 lg ЭЛД 50 /0,2 см 3 из-за понижения чувствительности УЭ. Кроме Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека