NED373390NED

152 Актуальные вопросы болезней птиц и других видов животных Материалы и методы В работе использовали два штамма вируса ИББ птиц: «БГ» и «К-58». Предварительно проверенной на инфекционную активность, отсут- ствие контаминации микоплазмами и посторонними вирусами, матровой расплодкой инокулировали 9-11-суточные эмбрионы СПФ-кур следую- щим образом. На границе подскорлупной оболочки и хориоаллантоис- ной оболочки (ХАО) делали насечку, не повреждая ее, и затем с помо- щью шприца вводили вирусосодержащий материал на ХАО в количестве 0,2 см 3 . Отверстие в скорлупе заклеивали лейкопластырем. Инфицированные эмбрионы инкубировали при температуре 37,5°С в течение 48-120 ч. После 48 ч овоскопию проводили через каждые 3 ч и отбирали павшие эмбрионы, которые разделывали и замораживали при температуре минус 60°С. Полученный вирусосодержащий материал размораживали, измельча- ли, экстрагировали при 4°С в течение 45 мин, дважды промораживали- оттаивали, добавляли фосфатный буферный раствор рН 7,6 и центрифу- гировали в течение 20 мин при 3000 об/мин. В полученной вирусосодержащей жидкости определяли инфекци- онную активность титрованием на 10-суточных эмбрионах СПФ-кур. Титр вируса определяли по методу Кербера в модификации И.П. Аш- марина (3). Вирусосодержащую суспензию после добавления стабилизаторов фасовали по 4,0 см 3 в стерильные пенициллиновые флаконы, проморажи- вали при температуре минус 70°С необходимое время и подвергали лио- филизации. Для определения иммуногенности были использованы сухие вирус- вакцины, изготовленные на основе исследуемых штаммов вируса ИББ, которые хранили при положительной температуре (6±2°С). В опытах ис- пользовали цыплят 14-суточного возраста. Иммунизацию проводили дву- кратно методом выпаивания с водой с интервалом 10 суток. Через 14 су- ток после второй вакцинации отбирали пробы крови, получали сыворотки и исследовали их методом ИФА. Результаты исследований На первом этапе проводили сравнительную оценку гибели инфици- рованных эмбрионов во время инкубирования при температуре 37,5°С. В табл. 1 представлены данные овоскопии эмбрионов и гибели их в различ- ные сроки после заражения различными штаммами вируса ИББ. Электронная Науч ая СельскоХозяйственная Библиотека