NED373390NED

132 Ящур и другие болезни крупного рогатого скота и свиней Материалы и методы Антиген. В работе использовали антиген вируса болезни Ауески штамм «ВК», полученный методом, описанным ранее (3). Сыворотки. В качестве отрицательного контроля использовали сыво- ротку крови свиней, не имеющую антител к вирусу БА. В качестве поло- жительного – гипериммунную сыворотку, полученную после трехкратной иммунизации свиней вакцинным штаммом «ВК» БА. Конъюгат. Использовали коммерческий антивидовой иммуноперок- сидазный конъюгат против IgG свиньи (фирма «Sigma»). Иммуноферментный анализ. Непрямой вариант иммуноферментного анализа проводили по стандартной схеме. На сенсибилизированные анти- геном планшеты наносили контрольные и испытуемые пробы сывороток крови свиней и инкубировали при 37°С в течение 1 ч. Образовавшийся комплекс антиген-антитело выявляли добавлением антивидового перок- сидазного конъюгата, взятого в рабочем разведении. Планшеты инкуби- ровали 1 ч при 37°С. Между этапами реакции несвязавшиеся компоненты удаляли путем промывания лунок планшета 3-4 раза промывочным бу- ферным раствором. Индикацию реакции проводили с помощью субстрата ОФД в 0,05 М фосфатно-цитратном буферном растворе (рН-5,0) с добав- лением 0,02% перекиси водорода. Планшеты инкубировали при комнат- ной температуре от 5 до 15 мин. Реакцию останавливали добавлением в лунки планшетов по 50 мкл 10%-й серной кислоты. Показания оптиче- ской плотности (ОП) содержимого каждой лунки измеряли с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом при длине волны 492 нм. Обработка результатов. Использовали стандартные способы ста- тистической обработки выборок варьирующих переменных, определяли средние оценки выборок и доверительные интервалы, оценивали взаи- мосвязь между lg(S/P) и lgT и определяли коэффициенты корреляции и регрессии (А и В) для уравнения lgT = А + В х lg(S/P). Значение S/P по- казателя рассчитывали по формуле: где ОП исслед. сыв. – оптическая плотность исследуемой сыворотки; ОП отр.контр. – оптическая плотность отрицательной контрольной сы- воротки; ОП полож.контр. – оптическая плотность положительной контрольной сы- воротки. Электронная Научная СельскоХ зяй тве ная Библиотека