NED373389NED

426 Вопросы биотехнологии результатами биотестирования с помощью гидробионтов (инфузо- рий стилонихий). Материалы и методы В опыте использовали монослойные культуры клеток: пере- виваемую - МДВК и первичную - СП. Питательные среды - ПСП (аналог минимальной среды Игла-МЕМ) и 0,4 % ГЛА на растворе Эрла - для клеток СП. Объектами исследования были корма для животных (комбикор- ма, мука рыбная, шрот подсолнечниковый, кукуруза), которые прове- рялись на токсичность с помощью стилонихий (ГОСТ Р 52337-2005), где была установлена определенная степень их токсичности. Исследованы водные экстракты кормов, которые после филь- трации прошли стерилизацию автоклавированием при 1 атм в те- чение 30 мин. Непосредственно перед опытом готовили рабочие разведения экстрактов питательными средами из расчета, что ко- нечное разведение 1:100 соответствовало разведению пробы при исследовании с помощью стилонихий (9). Корректировка рН сре- ды с экстрактом пробы проводилась стерильным 7,5% раствором соды (NaHCO з ). Начальное значение рН составляло 7,2 - 7,3. В работе использовали 50 г матрасы с 48 ч монослойной куль- турой клеток МДВК и 4-5-сут. культурой СП. Для проведения ис- следований отбирали матрасы только с полным монослоем, харак- терным для данного вида клеток, из расчета не менее 3-х матрасов для каждого образца и контроля. Ростовую среду сливали и вноси- ли исследуемые экстракты в объеме 8-10 мл на матрас, после чего их помещали в термостат при температуре 37 0 С и через каждые 24 часа проводили просмотр клеточного монослоя под микроско- пом. Цитотоксическое действие испытуемых экстрактов характери- зовалось наличием округлённых клеток («зернистость»), затем их некрозом и отслоением от стекла. Степень дегенерации монослоя клеток оценивали в процентах: исходный монослой клеток в контроле принимали за 100%. Результаты и обсуждение Исследования показали, что культуры клеток МДВК и СП чувствительны к токсическим веществам, содержащимся в экс- Э ектр нная Научная СельскоХозяйственная Библиотека